microRNA作为早期诊断深静脉血栓生物标志物的研究

Deep vein thrombosis (DVT) after joint replacement is a common postoperative complication, its lethiferous complication pulmonary embolism is the leading cause of death in patients. Because of the fact that current diagnostic measures of DVT are deficient, missed diagnosis can happen. Recent studies suggest that different kinds of microRNA (miRNA) can act as the biomarker of different diseases, especially in cancer, but these researches did not involve the relation between DVT and miRNA. In this research, we will establish the plasma bank of the patients who receive phlebography, to find whether there are some plasma miRNA which have relationship with the development of DVT by using RNA extraction, microRNA array, realtime-PCR, and to explore the signal pathway of miRNA regulating the development of DVT by using RNA silencing, finally, we will generalize which miRNA can act as the biomarker of DVT, its application will be helpful to early diagnose and treat the DVT in clinical.

人工关节置换术后深静脉血栓（deep vein thrombosis, DVT）是一种常见的骨科术后并发症,其导致的肺动脉栓塞是术后患者死亡的首要因素。目前用于诊断DVT的临床措施尚不完善,进而导致该疾病一定程度的漏诊。而近年来研究人员在对肿瘤等疾病的研究过程中发现microRNA（miRNA）可以作为早期诊断多种疾病的生物标志物，但这些研究尚未直接涉及DVT。本课题通过建立人工关节置换术后深静脉造影患者血浆库，采用RNA抽提、低密度芯片、实时定量PCR等方法，寻找与DVT发生发展相关的血浆miRNA，并使用RNA沉默等方法分析目标miRNA调控DVT发病的信号通路，最后通过统计学分析归纳出可以作为早期诊断DVT生物标志物的血浆miRNA，指导术后DVT的早期诊断和治疗。

本课题组在国家自然基金面上项目“microRNA 作为早期诊断深静脉血栓生物标志物的研究”的支持下，已募集DVT患者静脉造影库及血液标本数量已经超过3000例，并在不断的增加。其中关节置换术后下肢深静脉血静脉造影库超过2200例，关节镜手术后下肢术后深静脉血静脉造影库超过800例，临床资料完备包括深静脉造影资料、手术方式、手术时间、抗凝方案、凝血三项等指标。实验人员以血液标本为基础，建立起相对应的血浆库、血清库和DNA库，研究了DVT的遗传学相关性，即NOS3基因位点rs1799983与DVT的发生显著相关，该位点T等位基因型是骨科术后患者发生DVT的危险因素。我们进一步通过动物模型及动物体内实验证实了NO微泡可促进血栓的溶解，其作用机制可能与NO微泡对血小板及炎性细胞聚集的抑制作用相关。 本课题也找到了相应microRNA作为影响DVT的标记物，我们通过miRNA扫描芯片研究发现338个miRNA在DVT患者中的含量相对于正常人发生了显著变化，最后发现miR-582, miR-195, miR-532在DVT患者组中含量显著升高。我们目前通过蛋白质组学，利用TripleTOF5600质谱平台筛选出了拟行全膝关节置换术患者免疫炎症，凝血，营养方面的血液蛋白标志物（如C5、Plg、Pros、apoB），从而构建了预测患者术后血栓发病率的血浆蛋白质组层面的评价体系，并筛选出潜在的预测拟行全膝关节置换术患者并发血栓的相关蛋白。研究结果还需要进一步验证研究，阶段性结果正在撰写中。本课题还对DVT患者进行了详实的术后随访，关注病人愈后，统计出了一系列和术后下肢深静脉血栓的发生率研究统计，认为DVT和年龄、体重指数、胆固醇、高密度脂蛋白、载脂蛋白A血管评分及患者的恶性肿瘤病史都显著相关。我们通过在完成本项目的同时，共发表高质量论文19篇，另有数篇论文在攥写中。