一种新型插入突变技术在寻找孤核受体RORα调控因子中的应用

本项目利用一种新型的插入突变系统，寻找孤核受体RORα信号通路的调控分子。该系统首先将筛选基因与带有RORα结合序列的启动子结合，构建稳定表达筛选基因的细胞株，再利用慢病毒载体引入一个外源强启动子转染上述细胞株，继而造成该启动子在宿主细胞基因组中随机插入，通过对构建在宿主细胞上的筛选基因表达进行鉴定，筛选出突变细胞株，最后利用反向PCR方法确定插入位点，从而发现具有RORα调控功能的基因。该系统操作便利适用范围广泛，生物安全性高，可以大规模的应用于转录因子调控蛋白的寻找和鉴定。本项目中所选用的RORα分子在机体的生理和病理过程中发挥着重要作用，对于RORα信号通路分子调控的研究将为人类疾病的预防提供新的靶点，本系统的成功实施也将为其他孤核受体信号通路调控蛋白的寻找提供一种新的研究模式。

通过项目实施，课题组将VBIM慢病毒随机插入诱变系统与体细胞遗传学结合在一起，成功地将VBIM慢病毒随机插入诱变系统与引入到孤核受体ROR信号转导调控研究之中。课题组首先建立了受RORα孤核受体信号转导控制的Zeocin和TK稳定表达细胞株，然后将VBIM慢病毒随机插入诱变系统应用到该细胞株之中，通过感染、克隆筛选及鉴定，成功筛选得到3个与孤核受体ROR信号转导调控相关的基因。其中，筛选得到了文献报道与RORα信号转导密切相关的分子LXRα，为深入研究RORα信号转导功能打下了基础，另外两个筛选得到基因的研究工作将深入进行下去。通过项目实施，扩大了VBIM慢病毒随机插入诱变系统的适用范围，弥补了传统体细胞遗传学的不足。在项目工作期间，项目组获得甘肃省科技进步二等奖1项，发表学术论文3篇，另有3篇正在投稿阶段，培养研究生8名，毕业2名。