超声激活声动力复合脂质体靶向治疗肝癌的实验研究

Liver cancer is a common malignant tumor in our country. At present, there is no ideal treatment except surgery and chemotherapy. Sonodynamic therapy (SDT) was a new type of anti-cancer method. We fristly found that sonosensitizers could effectively kill tumor cells with low frequency ultrasonic activation (Ultrasonics, 2011; Ultrason Sonochem, 2008). Sonosensitizer-liposomal chemotherapeutic complex (No.201210171178.3) was firstly raised based on previous studies. Sonosensitizers and traditional chemotherapeutic drugs were combined to a drug delivery system by application of the new nano technology. Use the lipid structure of liposomes assisting sonosensitizer chlorin to target to tumor tissue. SDT, producing a series of chemical reactions activated by radiation to kill tumor cells, may be an optional treatment for localized tumors and improve effectiveness of the chemotherapy. This subject prepared epirubicin-chlorin liposomal-complex.The encapsulate rate and leakage rate of liposomes were determined by HPLC. The targeted effect of liver cancer was verifed through the in vivo and in vitro experiments. In addition, the mechanisms of anti-cancer were studied on levels of molecule, cell, tissue and the whole body.

肝癌是我国常见恶性肿瘤，目前除手术切除及化疗外，尚无理想的治疗方法。声动力疗法是一种新兴的肿瘤治疗方法，课题组前期研究发现低频超声激活声敏剂可以有效杀伤肿瘤细胞(Ultrasonics, 2011; Ultrason Sonochem, 2008)。在此基础上我们首次提出声动力复合脂质体(专利号：201210171178.3)，应用新型纳米技术，将声敏剂与传统化疗药物组成载药系统。利用脂质体的类脂结构辅助声敏剂二氢卟吩更好地聚集于肿瘤组织，通过超声波激活积聚在肿瘤细胞内的声敏剂，继而产生一系列的生物化学反应，使复合脂质体化疗具有靶向性，双重杀伤肿瘤细胞，达到协同增效作用。本课题拟制备表阿霉素-二氢卟吩复合脂质体，HPLC测定脂质体的包封率和渗透率。通过离体和在体实验，验证复合脂质体对肝癌的靶向治疗作用，并从分子、细胞、组织和整体动物水平多个层面研究其抗肝癌作用的确切机制。

肝癌的高发病率和高死亡率成为危害我国国民健康的主要来源。肝癌的临床治疗现状十分严峻，迫切需要开发出新的治疗方法。脂质体纳米粒一种无毒且生物相容性良好的材料，具有较高的载药量，易于制备，可以富集于肿瘤部位，改变药物的组织分布。脂质体阿霉素已经用于临床并取得了较好的疗效。声动力学疗法（SDT）是利用超声（US）激活肿瘤部位富集的声敏剂，达到杀伤肿瘤细胞和抑制肿瘤组织生长的目的。但目前尚没有发现化疗类药物联合声动力的研究。因此，我们采用薄膜分散-挤出法相结合来制备阿霉素-二氢卟吩e6复合脂质体。通过多种仪器检测脂质体纳米粒的表征，证实其为类圆形，粒径均一，粒径在100nm左右。具有良好的稳定性，较高的载药率和表面电荷，是一种优良的药物载体。进一步，荧光显微镜观察发现：复合脂质体相较于单纯游离药物，能够更高效的被肝癌HepG2细胞所摄取。孵育4小时左右，药物均已摄入肝癌细胞。CCK8实验结果表明，超声可以激活二氢卟吩e6产生显著抑制肝癌HepG2细胞生长的作用(P<0.05)，并呈浓度依耐性（P<0.001）。超声结合阿霉素-二氢卟吩e6复合声动力脂质体组相较于其他各组的肝癌HepG2细胞杀伤作用，均具有明显的统计学差异（P<0.05）,提示超声结合复合声动力脂质体能够显著增加肝癌细胞杀伤作用。复合脂质体的体内抗肿瘤作用研究发现，复合脂质体组的小鼠的肿瘤体积和重量较其他实验组低，具有统计学差异，表明DOX和CE6+US均对肿瘤生长有抑制作用，当二者联用时，其抑制作用最强。本研究证实了化疗药物联合声动力疗法的抗肿瘤作用，为临床推广应用提供理论支持和实验依据。.另外，我们制备了5-氟尿嘧啶脂质体、载阿霉素-二氢卟吩介孔二氧化硅纳米粒，并完成了表征及抗肿瘤研究，取得了较好的实验结果。