基于亚细胞蛋白组学研究半枝莲活性成分诱导肝癌细胞凋亡分子机制

半枝莲作为单药或复方治疗肝癌等恶性肿瘤已有上百年的临床经验，但是其作用机制尚不清楚。我们在以往研究中发现，半枝莲提取物(ESB)可有效诱导肿瘤细胞凋亡，且其机制与线粒体通路有关。在此基础上，建立ESB诱导的肝癌MHCC97-H细胞线粒体凋亡模型，应用蛋白质组学分析的电泳法策略和鸟枪法策略鉴定细胞凋亡前后的线粒体/核差异表达蛋白质。通过研究细胞凋亡前后线粒体和核蛋白质组表达的变化，寻找凋亡过程中的关键蛋白，并进行差异蛋白验证和功能研究，结合生物信息学的方法，深入探索细胞线粒体凋亡途径与药物的作用机理。为半枝莲在抗肿瘤药物的开发应用方面提供坚实的理论基础。

申请者在以往小鼠肝癌H22细胞的研究中发现，半枝莲粗提物（ESB）可有效诱导肿瘤细胞凋亡，且其机制与线粒体通路有关。在此基础上，我们建立了TF-SB诱导的肝癌MHCC97-H细胞线粒体凋亡模型。流式细胞术和DNA ladder检测结果检测均显示随着ESB浓度的增加，凋亡细胞的比例也逐渐增加。JC-1标记，流式细胞仪检测结果显示：随着实验组药物浓度的增加，MHCC97-H细胞的线粒体膜电位下降越显著，呈剂量依赖效应。应用RayBio Human Antibody Array检测细胞凋亡前后线粒体差异蛋白质，共筛选出54种相对表达量差异有统计学意义的蛋白质。其中分子功能主要与能量代谢、核酸的翻译、转录、复制，细胞分裂增殖、分化凋亡，以及信号转导有关。该实验结果为半枝莲在抗肿瘤药物的开发应用方面提供坚实的理论基础。