RNA干扰方法建立酸性鞘磷脂酶基因沉默小鼠的研究

启动卵母细胞凋亡信号的神经酰胺主要由酸性鞘磷脂酶（SMPD1）水解鞘磷脂产生，阻断SMPD1表达可有效抑制卵母细胞凋亡而实现卵巢保护。本研究利用RNA干扰原理和转基因动物制作方法，按照我们前期实验已证明能有效干扰SMPD1表达的siRNA序列构建shRNA表达框，以受精卵雄原核注射的方法制作表达靶向SMPD1基因siRNA的基因沉默小鼠。并通过观察其生殖细胞贮备量、正常排卵及超排卵的数目、生育年龄等指标来研究靶向SMPD1基因的siRNA对卵母细胞的保护作用及其它药理毒理学作用。本研究的主要意义是为研发女性生殖细胞保护的siRNA类药物奠定理论和实验的基础，同时也为研究女性生殖细胞的发生与凋亡的机制建立动物模型。本研究采用的是一种全新的基因敲除方法，本方法不仅比传统的基因敲除简单快速、成本低廉，更重要的是它可直接用于寻找确定siRNA类药物作用靶点、检测siRNA药物的药效及毒理学指标。