应用RNA干扰技术制备EGFP基因沉默小鼠的研究

本项目针对小鼠基因沉默中的关键薄弱环节，以绿色荧光蛋白（EGFP）转基因小鼠为对象，以建立、提高和完善基于RNA干扰的小鼠基因沉默技术为目标，拟开展以下研究：（1）以EGFP为沉默效应的报告基因，分别构建茎部结构为21、27、29bp的siRNAEGFP干扰载体；（2）利用原核显微注射法分别制备EGFP基因沉默小鼠：（3）根据荧光信号的淬灭情况检查不同组织、不同转基因鼠间的基因沉默效应，并结合干扰载体的整合位点、拷贝数和表达情况进行综合分析，确定适合小鼠个体水平基因沉默研究的最适发夹结构类型，并提供基因沉默载体整合、拷贝数、及潜在副效应的基础性资料。项目的实施将建立小鼠基因沉默技术体系，为小鼠个体水平的RNAi研究提供基础性数据和资料，为哺乳动物个体水平的基因功能研究提供有力的技术平台，也将为基因沉默技术在家畜育种中的未来应用打下基础，具有十分重要的理论及实践意义。