棉花外源基因叶绿体转化体系的建立及其应用

根据目前发布的棉花叶绿体基因组序列，设计引物扩增棉花叶绿体转化靶位点相关基因同源序列及叶绿体基因特异表达启动子、终止子等调控序列；以绿色荧光蛋白基因（gfp）基因为报告基因，以aphA-2（nptⅡ）和aphA-6 两个基因为选择标记基因，构建棉花叶绿体转化载体结构；用基因枪法轰击棉花胚性细胞团，经过对受体细胞进行卡拉霉素抗性筛选，获得叶绿体同质化的转化细胞团，最后通过棉花体细胞胚胎发生途径获得叶绿体转化的再生棉花植株；同时利用具有我国自主知识产权的抗虫基因（bt）载体结构，将抗虫基因构建到叶绿体转化载体中，导入到棉花叶绿体基因组，检测抗虫基因在叶绿体转化载体中的表达水平、抗虫效果及遗传特性,获得新型转基因抗虫棉材料。