抗癫痫药严重皮肤超敏反应时T细胞毒性和大陆汉族人标识基因HLA-B*1502关系的研究

抗癫痫药物引起严重皮肤超敏反应可迫使患者停药而妨碍疾病的治疗。研究抗癫痫药超敏反应机制可探索出测定药物严重皮肤超敏反应的方法。我们前期研究表明：T细胞在药物超敏反应中起重要作用。抗癫痫药卡马西平超敏患者淋巴细胞体外对药物反应明显增加并使药物特异性CD8+ T细胞毒性增加。文献报道亚裔癫痫患者携带HLA-B*1502基因与卡马西平严重皮肤超敏反应有密切相关性，而目前对抗癫痫药过敏患者HLA-B*1502标识基因与药物特异性CD8+ T细胞毒性关系尚未见报道。本课题将从大陆汉族抗癫痫药超敏患者淋巴细胞入手，采用淋巴细胞转化实验确定细胞增殖反应，并用系列稀释法产生T细胞观察不同药物特异性CD8+ T细胞毒性；PCR-SSP测定基因HLA-B*1502并比较是否与CD+ T细胞毒性有关。此研究探索药物严重皮肤超敏机制并可预防临床严重皮肤超敏反应发生对个体化给药有十分重要的指导意义。

卡马西平（Carbamazepine, CBZ）是临床上治疗癫痫及三叉神经痛的常用的口服药物之一。由于引起严重皮肤过敏反应可迫使患者停药而妨碍疾病的治疗。本课题将从大陆北方地区卡马西平过敏患者血中淋巴细胞及DNA入手，探讨以下三方面内容：.1．药物特异性增殖反应及CD8+细胞测定：我们试图把淋巴细胞转化实验(LTT)改用MTT实验以观察是否可用MTT方法代替LTT实验，因为LTT试验具有H3放射性污染。本实验结果表明给药组与对照组比较使用MTT实验药物特异性淋巴细胞无特异性增殖。 说明MTT实验在进行淋巴细胞药物特异增殖实验时不能取代LTT实验。药物特异性CD8+细胞表型初步测定结果表明CBZ过敏组CD8+数目绝对数明显高于对照组。.2．HLA-B*1502 标识基因测定：通过PCR-SSP方法使用Man 的4对特异性引物（P1，P2，P3，P4）和2对内参进行样品HLA-B*1502基因的测定。结果发现引物P1和P3测定后不能反映测定结果。我们对P1和P3引物进行改进，使测定结果准确。同时对测定方法改进，使用一种方便的multiplex PCR 方法进行基因测定。结果显示HLA-B*1502基因频率在SJS/TEN 病人发生率为12.5%（1/8）， 斑丘疹病人发生率为2.3%(1/43)，用药未过敏的病人的发生率为1.4%(1/68),正常对照发生率为0%(0/57)。统计学表明SJS/TEN组与未过敏组和对照组比较均无明显差异（P＞0.05）。结果说明HLA-B*1502基因与大陆北方地区癫痫病人严重皮肤过敏反应无明显相关性。.3．HLA-B*4601 标识基因测定：卡马西平过敏病人检测结果表明HLA-B*4601基因在SJS/TEN组有3例(3/8,37.5%),CBZ引致MPE组有5例(5/17,29.4%),用药无皮肤不良反应组2例（2/36，2.5%），正常对照组4例（4/50，8%）。CBZ引致的SJS组，MPE组患者HLA-B*4601基因型阳性率与无皮肤过敏组及正常对照组比较差异有显著性统计意义（P＜0.05）。提示HLA-B*4601或许可以成为监测大陆北部地区卡马西平皮肤过敏反应的指标，为临床在病人用药前提供检测，避免药物引起的不良反应。