当归拈痛汤方中不同治法对类风湿性关节炎信号转导网络调控机制的研究

类风湿性关节炎（RA）是当前世界范围内严重威胁公众健康的慢性疾病之一。治疗上也缺乏针对性措施。大量临床研究资料证实，当归拈痛汤防治RA疗效确切，但作用机制尚不完全清楚，为进一步揭示中医药防治RA机制，本课题拟在前期研究工作基础上，以当归拈痛汤为研究对象，将该方剂按照药物的功用拆分为四大治法组（祛风法、利湿法、清热法、健脾法）, 通过利用蛋白质二相分离、质谱分析和液相芯片等多种分子生物学技术，筛选与不同治法有内在相关性的蛋白质，应用生物信息学分析类风湿性关节炎发生的有关因子与细胞信号分子（磷酸化蛋白）的内在联系，进一步研究不同治法存在差异的蛋白质表达图谱，以明确类风湿性关节炎治疗过程中不同治法的信号转导机制，揭示祛风法、利湿法、清热法、扶正法治疗RA的作用靶点及调控机理，并为今后实现辨证论治个体化提供其实验依据。

类风湿性关节炎（RA）是当前世界范围内威胁公众健康的慢性疾病之一。临床研究资料证实，当归拈痛汤防治RA疗效确切，本课题在前期研究工作基础上，以当归拈痛汤为研究对象，将该方剂按照药物的功用拆分为两大治法组（祛邪组、扶正组）, 通过利用蛋白质二相分离、质谱分析和液相芯片等多种分子生物学技术，筛选出与类风湿性关节炎有内在相关性的蛋白质，应用生物信息学分析了类风湿性关节炎发生的有关因子与细胞信号分子（磷酸化蛋白）的内在联系，进一步研究了存在差异的蛋白质表达图谱，以明确类风湿性关节炎治疗过程中当归拈痛汤的信号转导机制。. 研究结果显示（1）当归拈痛汤有明显的抗炎、镇痛、免疫调节作用，可显著抑制佐剂性关节炎大鼠（AA）大鼠足跖肿胀及多发性关节炎，提高AA大鼠的压力耐痛值，改善AA大鼠的免疫器官指数，同时明显减轻病变关节滑膜炎症与增生、防止关节软骨及骨质的破坏。(2) liqui chip蛋白液相芯片技术检测细胞因子结果显示：当归拈痛汤可以抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-分泌、提高免疫调节因子IL-4、IL-10细胞因子水平。(3)蛋白质学研究表明当归拈痛汤抑制RA滑膜的病理改变作用明确，其可能机制：抑制组织局部的炎症反应信号通路（Interleukin-1 receptor antagonist protein，Hsp27）；保护细胞结构（Myosin regulatory light chain 2，Mimecan，40S ribosomal protein SA，Hsp27，Vimentin）；抑制氧化应激反应（Peroxiredoxin-2）。这为揭示当归拈痛汤的活性成分的分子作用机制提供了新的实验证据，也为从分子水平上全面准确地评价中药方剂及其活性成分的作用机制提供方法学基础。（4）对本课题获得的参与当归拈痛汤调控的炎症因子及蛋白质进行功能作用分析，发现当归拈痛汤的作用主要涉及两条通路：MAPK信号通路和STAT信号通路。（5）从当归拈痛汤拆方的作用来看，无论祛邪组还是扶正组，其抑制TNF-的作用和升高IL-4、IL-10的作用均不如全方组。仅比较祛邪组与扶正组，可以发现：扶正组抑制TNF-的作用更加显著；而祛邪组升高IL-4、IL-10的能力相对较强。因此，从这个角也证明了当归拈痛汤组的合理性，其祛邪与扶正成分必须联合应用，才能达到最佳治疗效果。