牙龈卟啉单胞菌凝血素研究

牙周病导致牙齿丧失，是全身疾病包括心梗，脑梗的发病危险因素。它的最主要致病菌是牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）。P.g的HA2(hemagglutinin 2)和血红蛋白的血卟啉结合促进P.g生长。有意义的HA2基因的多态分析及保护性抗体制备需要明确HA2与血红素结合位点。明确HA2与血红素结合位点为本课题目的。P.gATCC33277为出发菌，克隆重组表达HA2，确认重组HA2与氯化血红素结合功能。利用多肽内切酶消化与氯化血红素琼脂糖珠结合的重组HA2，获得包含结合位点的多肽片断，测定多肽的氨基酸序列，针对此序列进行基因定点突变。设计致突变寡核苷酸序列，制备突变质粒，表达突变HA2，确认突变HA2失去与氯化血红素结合功能。明确HA2与氯化血红素结合位点，为HA2的基因多态分析，保护性多克隆抗体制备，抗体工程技术制备保护性单克隆抗体打基础。