VIP及LF15-0195诱导培养的耐受性树突状细胞在实验性类风湿关节炎中免疫调节作用的研究

耐受性DC（tolerogenic dendritic cells， tDCs）具有诱导T细胞耐受从而抑制自身免疫炎性反应的作用，如何获得安全有效的耐受性DC已成为自身免疫性疾病治疗新的研究方向。免疫抑制性神经肽-血管活性肠态（VIP）能通过与DCs表面受体结合调节DCs的表型和功能，而核因子κB（NFκB）是参与DC成熟的重要的核转录因子，故本研究通过对VIP、NFκB拮抗剂（LF15）及二者联合干预诱导培养获得的tDCs的细胞形态学、细胞表型、刺激淋巴细胞活性及其所分泌细胞因子和自身抗体等研究，比较不同体系获得的tDCs 体外特征的异同，并系统观察其干预治疗胶原诱导的关节炎小鼠关节炎评分及滑膜病理学、关节MRI改变，同时通过对不同组别小鼠体内自身抗体水平、Treg细胞数量及功能活性、单个核细胞刺激试验、Treg细胞抑制试验等测定，进一步揭示tDCs在RA发病机理及抗原特异性免疫耐受作用

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是典型的自身免疫性疾病，DC在RA的体内免疫调节机制中扮演着双重角色，利用耐受性DC（tDC）诱导并维持免疫耐受耐受状态已成为RA发病机制研究及RA治疗的研究热点之一。本研究目的即为通过比较不同来源（血管活性肠肽或NFκB抑制剂诱导）tDC的特性，为其在实验性类风湿关节炎动物模型中应用打下理论基础。首先应用小鼠骨髓来源DC进行细胞培养，分别给予不同浓度VIP、Bay及空白对照干预后收集细胞，流式细胞仪检测与常规培养DC组比较，VIP 40ng/ml 及Bay 0.5ug/ml诱导培养的tDC，具有低表达ＭＨＣⅡ、CD40、CD80、CD86分子特性，故被选取作为合适浓度用于诱导培养tDC，同时ELISA检测不同培养条件下各组上清液中细胞因子表达情况，其中IFNγ表达在VIP-DC及Bay-DC组均较空白DC组降低（P<0.05）, 而IL-4表达则较正常DC组则明显升高（P<0.05）。成功诱导了DBA/1小鼠关节炎模型，随机分为4组，分别为空白对照组、空白DC组、VIP-DC组及Bay-DC组，每组6只。生理盐水、空白DC（未经细胞因子处理的DC）、VIP-DC及Bay-DC（均约为1×106细胞）分别作为疫苗给予CIA小鼠腹腔注射后观察关节炎评分情况，VIP-DC及BAY-DC治疗组关节炎积分下降趋势均较对照及空白DC对照组明显，但无统计学差异；各组动物踝关节microMRI检测， VIP-DC组及Bay-DC组CIA小鼠后肢关节滑膜增厚程度及肿胀程度减轻均较对照及空白DC组均有所减轻；受累关节组织学检查显示VIP-DC及Bay-DC组均较阳性对照及空白DC组具有较少的骨侵蚀（P=0.002，P=0.026）；VIP-DC较阳性对照组血管翳评分明显减低（p=0.005）。同时，与发病组比较，VIP-DC治疗组TNFα水平下降，IL-1β水平则较空白DC治疗组下降（P<0.05）；Bay-DC治疗组中IFNγ、IL-1β则较发病组明显降低，IL-1β也低于空白DC组（P<0.05），而IL-4水平则明显高于其余三组。本研究成功诱导培养出可用于干预CIA动物模型的关节炎发病过程的tDC，形成了临床、影像学、病理学、血清学的全面评价体系，为细胞治疗逐渐过渡到人体研究打下基础。