真菌毒素及其生物降解在真菌性角膜炎中的作用

Fungal keratitis is an important cause of corneal blindness in China .Both virulence factors and host immune response may play a critical role in its pathophysiology. Mycotoxins which is secondary metabolites of fungus , are cytotoxic and immunotoxicity as an important tool for fungal invasion of pathogenic. Using the method of microorganisms such as supernatant of the cultured lactic acid bacteria can significantly inhibite the mycelium growth and deteriorate many kinds of mycotoxins effectively. It was reported that Fungi isolated from the lesions of keratitis patients might produce a variety of fungal toxins through cultured in vitro, and there are some relationship among toxin types , strains of fungi and corneal inflammation. In this research we intend to apply the cell culture technology and establish a mouse fungal keratitis model to detect the fungal toxin composition and concentration in the infectious corneas (cells),to research the toxic effects of these toxins to corneal tissue (cells) and immune function,to explore the feasibility of inhibition of corneal fungal invasion and degradation of mycotoxins with the method of microorganismsm, and to explain the complexity of the clinical pathology of fungal keratitis and reveal the relationship between the pathological damage and fungi by the diversity of fungal toxins.What's more,we will furtherly study the pathogenesis of fungal keratitis from the perspective of mycotoxins and provide new ideas and methods for treatment of fungal keratitis in the clinical.

真菌性角膜炎是我国角膜盲的重要病因，真菌毒力和机体免疫可能是其发病的主要因素。真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，具有细胞毒性和免疫毒性，是真菌侵袭致病的重要工具；而采用微生物的方法如培养乳酸菌的上清液能显著抑制菌丝体的生长和有效降解多种真菌毒素。研究发现，从临床上角膜炎患者的感染灶中分离出的真菌，在体外培养后可产生多种真菌毒素，且毒素种类、真菌菌种及角膜炎症之间存在相关。本课题拟应用体外细胞培养技术及建立小鼠真菌性角膜炎模型，检测感染角膜中的真菌毒素成分及其浓度，研究这些毒素对角膜的毒性作用及对免疫功能的影响，探讨利用微生物的方法抑制角膜中真菌侵袭及降解真菌毒素的可行性，从而通过真菌毒素及其作用的多样性解释真菌性角膜炎临床病理的复杂性，揭示临床病理损害与真菌菌种之间的相互关系及其机制，进一步从真菌毒素的角度研究真菌性角膜炎的发病机制，并为临床上真菌性角膜炎的治疗提供新的思路和方法。

真菌性角膜炎是我国角膜盲的重要病因，真菌毒力和机体免疫可能是其发病的主要因素。真菌毒素是真菌侵袭致病的重要工具，具有较强的细胞毒性和免疫毒性。既往研究发现培养乳酸菌的上清液能显著抑制菌丝体的生长和有效降解多种真菌毒素。本课题应用体外细胞培养技术及建立小鼠真菌性角膜炎模型，检测感染角膜中的真菌毒素成分及其浓度，并研究这些毒素对角膜的毒性作用及对免疫功能的影响，进而探讨唾液乳杆菌发酵上清（LSCF）在抑制角膜中真菌侵袭及降解真菌毒素的作用。重要研究发现：1. 在茄病镰刀菌性角膜炎病变发展中角膜组织中酪氨酸、脯氨酸、缬氨酸及胶原的相对含量下降；2. 真菌感染的角膜组织中可检测到少许伏马菌素（FB1）和呕吐毒素（DON）；3. 唾液乳杆菌发酵上清能够显著抑制茄病镰刀菌孢子萌发及菌丝生长，其主要抗真菌物质是一种酸性ph依赖的对蛋白酶k敏感的蛋白质多肽类物质，具有热不稳定性；4. LSCF通过增强细胞活力、抑制凋亡、下调致炎因子IL-6,TNF-a的表达，及降解真菌毒素，能有效抑制小鼠角膜基质细胞茄病镰刀菌的感染；5. IFN-γ滴眼治疗的小鼠真菌性角膜炎能够帮助机体更快地清除角膜中的真菌，增加角膜中巨噬细胞的聚集和浸润，使机体免疫向Th1方向偏移，缩短小鼠真菌性角膜炎的病程。本研究进一步揭示了真菌性角膜炎临床病理的复杂性，从真菌毒素的角度研究真菌性角膜炎的发病机制，是对真菌性角膜炎发病机制的重要补充，并为临床上真菌性角膜炎的治疗提供新的思路和方法。