CTLA-4/B7通路在调节性γδ T细胞调控造血干细胞移植后异源反应性T细胞活性中的作用

Acute graft-versus-host disease (aGVHD) is one of the most severe complications after allogeneic hematopoietic stem cell tranplantation. Regulatory γδT cells (γδTregs) is a novel kind of T cell subset with immunosuppressive properties. In our previous study we have established an efficient inducing and enriching system of γδTregs in vitro. Moreover, we found for the first time that γδTregs could negatively regulate aGVHD after allogeneic HSCT and CTLA-4/B4 pathway might play vital roles. Based on these, in the current study we will illucidate the important role of CTLA-4 in aGVHD regulation by γδ Tregs via CTLA-4 siRNA in mice models. Then we further study the molecular mechanisms that γδTregs activate CTLA-4/B7 pathway to reduce alloreactive T cells via inhibiting T cell activating pathways , then leading to negative regulation of aGVHD in molecular and cellular levels. We will also provide more evidences for the above mechanisms by using cell coculture system in vitro. Our research will provide exprimental evidences for establishing a novel strategy for aGVHD prevention and treatment. It will also lay the foundation of finding novel targets for aGVHD regulation.

急性移植物抗宿主病（aGVHD）是异基因造血干细胞移植（HSCT）的主要并发症，异源反应性T细胞直接介导aGVHD的发生发展。调节性γδT(γδTreg)细胞是新发现的细胞亚群；前期我们建立了γδTreg的诱导扩增富集体系，首次发现该细胞能够直接抑制异源反应性T细胞增殖活化并负向调控HSCT后aGVHD。B7分子高表达于异源反应性T细胞表面，预实验表明γδTreg高表达CTLA-4，提示CTLA-4/B7通路在调控aGVHD中可能起关键作用。本项目拟利用SiRNA、慢病毒转染和病理活检等技术阐明CTLA-4/B7通路抑制异源反应性T细胞活性致负向调控aGVHD的重要作用，进一步采用流式细胞术、ELISA、免疫印迹、荧光定量PCR等技术从细胞和分子水平研究γδTreg经该通路直接抑制T淋巴活化相关信号分子从而抑制T淋巴细胞活化的分子机制。本研究为发现γδTreg调控aGVHD的新机制奠定基础

急性移植物抗宿主病（aGVHD）是异基因造血干细胞移植后的主要并发症和死亡原因，肠道作为主要靶器官，累及率高、治疗效果差。肠上皮富含能分泌IL-17的固有免疫细胞γδT17细胞，该群细胞在病原体侵入组织后作用失调，但机制尚不明确。我们前期研究证明aGVHD小鼠肠上皮γδT17细胞随疾病进展上升，是肠道aGVHD炎性微环境中IL-17的主要细胞来源。这些发现表明γδT17细胞可能是小鼠肠道aGVHD的关键参与者并且具有预测预后的潜力。.小鼠原代γδT17细胞仅占脾脏的0.1%。为了验证γδT17细胞在aGVHD中的作用，我们建立了改良的γδT17细胞的体外诱导体系。然后我们对aGVHD小鼠模型同步回输了体外诱导纯化的γδT17细胞。随访至移植后第60天，aGVHD组小鼠全部死亡，aGVHD+γδT17组仍有40%小鼠存活，总体生存率得到明显改善（p＜0.01）。aGVHD+γδT17组小鼠临床评分显著低于aGVHD组。第28天对三组小鼠肠道进行病理评分，aGVHD+γδT17组小鼠肠道病理评分显著低于aGVHD组（1.75 ± 0.4787 vs 6 ± 0.4082，p＜0.001）。我们还检测到aGVHD+γδT17组小鼠肠道中髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）比例明显升高，已有报道表明MDSCs具有免疫抑制功能，可以负向调控aGVHD。体外实验表明，和γδT17细胞共培养24小时后，MDSCs的免疫抑制功能明显增强。因此我们推测，γδT17细胞能招募MDSCs在肠道聚集，发挥免疫抑制功能从而减轻aGVHD。.我们的研究表明，γδT17细胞在肠道aGVHD的防治中可能起到重要作用，这群细胞能招募MDSCs负向调控aGVHD，减轻肠道损伤。然而，γδT17细胞和MDSCs的相互作用机制仍有待进一步研究。我们相信，γδT17细胞作为肠道aGVHD中起保护作用的关键亚群，将具有非常诱人的临床应用前景。