猪带绦虫六钩蚴侵入宿主关键分子HSP作用机制研究

六钩蚴突破宿主屏障侵入宿主肠黏膜是猪囊虫发病的重要过程，本实验拟利用蛋白组学技术对用人工肠液激活与不激活六钩蚴中HSP的种类及变化进行研究，根据其他已登录GenBank的HSP基因序列信息设计引物对激活的六钩蚴中独有的HSP进行扩增和测序，将该HSP在真核表达系统中进行表达，分离纯化的表达产物免疫小鼠制备该HSP的单克隆抗体。用制备的HSP单克隆抗体与六钩蚴共同孵育在模式细胞上培养，探明HSP与六钩蚴入侵宿主的关系及发挥作用的方式。最后，用免疫共沉淀分析与HSP相互作用的肠粘膜上皮细胞膜蛋白，并分析该蛋白的大小及组织分布。.本研究对于揭示六钩蚴突破宿主黏膜屏障的分子机制，阐明囊尾蚴的发病机理和设计更科学合理的新型治疗药物提供理论基础，对科学防治猪囊虫病具有重要的理论意义和现实意义。

猪囊尾蚴病是一种重要的人兽共患病，但该病的发病机制还没有阐明。本研究以猪带绦虫六钩蚴为研究对象，揭示其侵入宿主关键分子—热休克蛋白（HSP）作用机制。建立了猪囊尾蚴动物模型和金黄地鼠猪带绦虫动物模型，提取了激活六钩蚴和未激活的六钩蚴总蛋白并获得差异蛋白，氨基酸测序在激活的六钩蚴中发现特异小热休克蛋白sHSP；成功克隆了猪带绦虫六钩蚴sHSP序列，将其装入载体pET-28a 中，成功构建重组表达载体PET-28a-sHSP35.6。制备了HSP单克隆抗体，构建了pVAXI-HSP35.6与增强型绿色荧光蛋白融合基因的重组质粒pVAXI-HSP35.6-EGFP，在Vero细胞中能成功表达并具有免疫原性，继而研究猪带绦虫六钩蚴侵入宿主关键分子HSP作用机制。这样能够为猪囊尾蚴的免疫控制提供有效的工具，同时也能为其他寄生虫病的免疫控制开辟新的途径。