卵巢癌铂类耐药标记蛋白Annexin A3耐药机制与外周血检测的深入研究

卵巢癌是妇科恶性肿瘤死亡率第一的恶性疾患，肿瘤细胞化疗耐药是其5年生存率得不到进一步改善的主要原因之一。运用铂类药物标记蛋白，早期发现肿瘤耐药，有助于临床及时更改化疗方案，改善预后。本课题组运用比较蛋白质组学技术，发现并证实一种卵巢癌铂类耐药标记蛋白Annexin A3，该蛋白能够以细胞内囊泡形成、转运、外泌体的形式分泌，初步检测到细胞培养基上清及人血清中均有Annexin A3的表达。本实验将从Annexin A3外泌角度，评估外泌体中铂含量，以及外泌Annexin A3对于卵巢癌细胞铂吸收及铂流出的影响，明确该蛋白在卵巢癌细胞中发挥铂类耐药的确切机制，进一步寻找封闭Annexin A3蛋白发挥作用的靶点和物质。同时建立稳定性较高的人外周血Annexin A3化学发光免疫法检测方法，确定人外周血中Annexin A3正常值范围，建立临床预测卵巢癌铂类耐药的预测模型。

卵巢癌作为死亡率居第一的妇科恶性肿瘤，影响其预后的主要因素为化疗耐药。因此，如何预示和逆转耐药是目前主要难点。本课题组前期研究运用蛋白质组学技术发现并证实了卵巢癌铂类耐药相关蛋白Annexin A3，并运用分子生物学技术证实其在调节卵巢癌铂类化疗药物耐药方面的生物学特性，同时发现这一重要蛋白的血清外泌特性。在此基础上，本课题首次探讨了Annexin A3调节卵巢癌铂类化疗药物的耐药机制，体外细胞实验发现并证实这一具备外泌特性的蛋白外泌水平与卵巢癌细胞内Annexin A3表达水平呈正相关关系，并且运用免疫电镜技术证实其外泌途径为胞内囊泡形成、转运，以exosome形式外泌至胞外，且exosome的外泌量与Annexin A3表达水平呈正相关关系；运用电感耦合等离子质谱技术证实Annexin A3通过exosome调节卵巢癌细胞对铂类化疗药物的外泌从而导致耐药产生。完成体外机制实验同时，外泌的Annexin A3蛋白水平能够良好预示卵巢癌预后是本课题的另一研究目标，本课题组成功构建了人血清Annexin A3 CLIA检测试剂盒，并且运用该试剂盒测定正常人群、卵巢良性肿瘤、上皮性卵巢癌患者Annexin A3表达水平，获得初步正常妇女人群Annexin A3表达正常值范围。并通过上皮性卵巢癌患者化疗前血清Annexin A3水平绘制ROC曲线，以2.05ng/ml为界值，预测上皮性卵巢癌患者对铂类化疗药物的敏感性为61.11%，特异性为80.88%。Kaplan-meier分析Annexin A3血清高浓度组PFS明显低于低浓度组（P<0.05）。基于以上研究成果，卵巢癌铂类耐药相关蛋白Annexin A3有望成为临床预测上皮性卵巢癌对铂类化疗药物是否耐药的血清学标记物。