周围神经冷冻保存损伤研究及CIRP、中药提取物的保护作用

The therapy of peripheral nerve defect have always troubled neuroscience and orthopedics.It is very important for the peripheral nerve defects repair that establish the allogenic nerve tissue bank, and that the cryopreservation of peripheral nerve is the key to establish the allogenic nerve tissue bank. Cryopreservation can lead to tissue and cell damage. In our previous studies (NSFC:81373668), Ligustrazine, ginseng saponin Rb1 and tripterygium glycoside can inhibit the apoptosis of peripheral nerve SCs and increase the activity of the peripheral nerve in cryopreservation, but the defect compared with the fresh nerve is very serious. The toxic effects of CPA and the low temperature and hypoxia, as well as the anti vitrification and Dilution infiltration, may cause severe damage to the peripheral nerves in cryopreservation, and preventing the occurrence of these injuries may be the key to the cryopreservation of peripheral nerves.. Cold induced RNA-binding protein (CIRP) is a kind of cold stress protein, which has a protective effect for the body in low temperature, hypoxia and osmotic stress. Ligustrazine and panaxosides can increase tissue ischemia and hypoxia tolerance. The central theme of this project proposal is to prevent the damage of the peripheral nerve by the expression of CIRP in cold preserved peripheral nerve and the effect of ligustrazine, ginseng saponin Rb1 and tripterygium glycosides, and to repair the injury of the peripheral nerve in vitro before nerve allogeneic transplantation.

周围神经缺损的治疗是神经科学和骨科学的难题。建立“异体神经组织库”，对于周围神经缺损修复极为重要，而周围神经冷冻保存是建立“异体神经组织库”的关键。冷冻保存会导致组织细胞损伤。我们研究发现（NSFC：81373668）：周围神经冷冻保存时，川芎嗪、人参皂甙Rb1、雷公藤多甙能抑制周围神经SCs细胞凋亡，提高保存后神经生物活性，但与新鲜神经相比差距较大。本项目提出：冷冻保护剂毒性和低温缺氧，反玻璃化与稀释性渗透，可能对冷冻保的周围神经造成严重损伤，预防/减轻这些损伤，可能是周围神经冷冻保存成功关键。冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）是一种冷应激蛋白，在低温、缺氧、渗透压应激下对机体具有保护作用，川芎嗪、人参皂甙能提高组织缺血缺氧耐受力。我们拟通过CIRP在周围神经保存时诱导表达，联合川芎嗪、人参皂甙Rb1、雷公藤多甙，来预防周围神经冷冻保存损伤，并在异体移植前对周围神经冷冻保存损伤行体外修复。

周围神经缺损的治疗是骨科学的难题。建立“异体神经组织库”，对于周围神经缺损修复非常重要。周围神经冷冻保存是建立“异体神经组织库”的基础，但周围神经冷冻保存会导致周围神经损伤，影响SCs细胞的生物学活性。本课题针对周围神经冷冻保存损伤进行了相关研究。.1. 中药提取物减轻周围神经冷冻保存损伤，促进移植后受者神经再生.①雷公藤甲素预处理能诱导大鼠坐骨神经表达神经营养因子，冷保存后能维持SCs较高活性，并能抑制冷保存神经免疫原性，同种异体移植后排斥反应降低，促进受者神经再生。.②丹参酮ⅡA对超低温冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用，能减轻长期液氮保存的大鼠坐骨神经损伤，维持了SCs的生物学功能，异体移植后支持神经再生。.③参附注射液对玻璃化冷冻保存的坐骨神经具有保护作用，能提高玻璃化保存坐骨神经生物活性，促进异体移植后神经再生。.2. CIRP促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用.大鼠坐骨神经在4 ℃、15 ℃、32 ℃预处理24h，可诱导CIRP 表达，以32℃预处理组表达最高。高表达CIRP的大鼠坐骨神经液氮冷冻保存4周，具有较高的SCs活性细胞，能促进异体移植后神经再生。.3. ENTFs对周围神经冷冻保存损伤的影响研究.体外预处理能诱导大鼠坐骨神经表达ENTFs，高表达ENTFs的坐骨神经（预处理2周组）-冷冻保存组的活性细胞，虽然没有新鲜坐骨神经-冷冻保存组和预处理1天-冷冻保存组、预处理3天-冷冻保存组及预处理7天-冷冻保存组多，但其免疫原性较低，异体移植后具有较好的神经再生效果。.4. HSP70对冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的影响研究.大鼠坐骨神经42℃热应激预处理1h能诱导HSP70高表达，高表达HSP70的坐骨神经冷冻保存后具有更高的生物活性细胞，异体神经移植后神经再生效果更好。.5. 臭茉莉叶总黄酮、木芙蓉叶黄酮、天葵子及其总生物碱研究.体外实验表明，臭茉莉叶总黄酮、木芙蓉叶黄酮、天葵子及其总生物碱均具有抗氧化活性，能清除DPPH、ABTS和PTIO自由基。.6. 大黄素对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用研究.大黄素能减轻脊髓损伤后的脊髓水肿和神经细胞的病理改变，其机制可能与抑制AQP-4、MMP-2表达，激活Nrf2-ARE，降低 NF-κB、ED-1、TNF-α、IL-1β、 IL-6 表达，促进GFAP、NG2表达有关。