基于玻璃化保存的周围神经保存研究及中药提取物的促进作用

The therapy of peripheral nerve defect have always troubled neuroscience and orthopedics. Nerve transplantation is commonly used to repair peripheral nerve defects at present, and nerve autograft is the gold standard for the peripheral nerve defects repair, but limited resources and new nerve injury of the donor area limit its clinic application. Because of their same basic structures , nerve allograft is the best substitute for nerve autograft, it is very important for the peripheral nerve defects repair that establish the allogenic nerve bank. However，there are fewer studies for allogenic nerve preservation at present, especially there are few studies of long-term allogenic nerve preservation that not only can maintain the activity of SCs ，but also can reduce the immunogenicity of nerve tissue. Vitrification that is a ultrarapid freezing method can improve cell viability of preservation，but cryoprotective agents（CPAs） of vitrification solution have severe biotoxicity，it is very important to reduce the toxicity of CPAs for the cell activity. Ligustrazine and panaxosides can increase tissue ischemia and hypoxia tolerance, and tripterygium glycosides has anti-inflammatory and immunosuppressive effects. By adding Chinese herbal medicinal ingredients to vitrification solution, the concentration and the biotoxicity of CPAs may be reduced, the activity of SCs may be maintain, and the immunogenicity of the nerve of cryopreservation may be reduce. In short, this method may promote the establishment and application of the allogenic nerve bank, and have great importance and wide development prospects.

围神经缺损的治疗是困扰神经科学和骨科学的难题。目前，周围神经缺损常需通过神经移植来修复。自体神经移植是修复周围神经缺损的"金标准"，但由于来源受限、供区永久失神经损伤，限制了临床应用。同种异体神经组织结构与自体神经相同，是自体神经最好替代品。建立"异体神经组织库"，对于周围神经缺损修复非常重要。 目前，国内外异体神经保存研究较少，特别是既能保持神经组织SCs活性、又能降低其免疫原性的长期保存研究极少。玻璃化冷冻保存是一种超速冷冻法，能提高保存细胞存活率。但玻璃化溶液中CPA具有严重的毒性，减轻CPA毒性是确保保存组织细胞高存活率的关键。川芎嗪、人参皂甙能提高组织缺血缺氧耐受力，雷公藤多甙具有抗炎与免疫抑制作用。在玻璃化保存液中添加中药成分，对于降低CPA浓度、减轻其毒性，维持神经组织SCs高存活率、降低神经组织免疫原性，促进"异体神经组织库"建立与应用，具有重要社会意义和广阔发展前景。

周围神经缺损的治疗是骨科学的难题。由于自体神经移植的临床应用受限，同种异体神经被认为是自体神经最好替代品。建立“异体神经组织库”，对于周围神经缺损修复非常重要。. “异体神经组织库”建立的关键是周围神经的离体保存，而玻璃化保存法是极具潜力的活体组织保存法。本课题针对周围神经玻璃化保存进行了相关研究。.1. 周围神经玻璃化保存研究.①通过正交试验设计和析因实验设计，筛选出了周围神经“基础玻璃化保存液”。.②研究了温度和时间对周围神经玻璃化保存的影响：保存时间相同时，玻璃化保存温度越低，神经纤维损伤程度越小；保存温度相同时，玻璃化保存时间越长，神经纤维损伤程度越重。.③研究了玻璃化保存对周围神经免疫原性的影响：玻璃化保存能明显降低周围神经免疫原性，减轻移植物抗宿主病发生。.2.中药提取物对周围神经玻璃化保存的影响.①不同保存温度、不同保存时间，保存液中添加一定浓度的中药提取物，能提高保存后神经的生物活性；.②保存液中添加一定浓度的雷公藤多甙，能削弱周围神经MHC-I和MHC-Ⅱ分子表达，减轻异体移植后炎症细胞入侵。.3.中药筋骨草活性成分提取及抗氧化活性研究.①筋骨草及其活性成分（总皂苷、多糖、总黄酮、生物碱）均具有较强的抗氧化活性；.②“基础玻璃化保存液”中添加筋骨草提取物，对玻璃化保存的坐骨神经具有保护作用，其中以添加总皂苷效果最好。.4.含中药提取物的璃化液对大鼠坐骨神经同种异体移植的影响.在不同保存温度、不同保存时间情况下，保存液中添加一定浓度的中药提取物，能提高保存的周围神经同种异体移植后受体神经的再生，促进肢体功能康复。.5.低强度脉冲超声波（LIPUS）、电针延缓失神经支配骨骼肌萎缩研究.LIPUS、电针均可延缓失神经骨骼肌萎缩进程，其机制可能与调控凋亡相关蛋白表达、减少细胞凋亡、抑制靶肌肉结缔组织增生有关。.6.周围神经玻璃化保存的生物安全性评价.周围神经玻璃化保存法无明显的细胞毒性和全身急性毒性，对试验动物无明显的肝肾功能损伤。