△ASPP2和ASPP2在肝组织中表达失衡与肝癌发生的机制研究

P53, a tumor suppressor gene, can bind to ASPP family members and play a critical role in tumor development. This field has been one of the hot spots for cancer research. ASPP2 can induce apoptosis through p53 dependent and independent pathways, which suppresses tumor development and even tumor growth. However, a recent study had identified ΔASPP2, which is an isoform of ASPP2 and contains 880 amino acid residues shorter than ASPP2 at N terminal. Preliminary studies have shown that ΔASPP2 can inhibit not only apoptosis, but also autophagy which can significantly affect tumor development and survival. Furthermore, the level of ΔASPP2 was identified to be higher in tissues of hepatocellular carcinoma (HCC). However, it is still unknown that how ΔASPP2 regulate ASPP2 mediated apoptosis by p53-dependent and -independent pathways and how ΔASPP2 affects HCC development. This study will use mice characterised by specific ΔASPP2 expression in liver tissue, molecular biology and cell biology techniques, to study the effects of the imbalance between ASPP2 andΔASPP2 expression on HCC development. This can give us new ideas about molecular mechanisms on HCC development and provide us new targets on curing HCC.

抑癌基因P53通过与其结合蛋白ASP家族的成员相互作用而对众多肿瘤的形成具有重要影响，这一领域也是目前肿瘤学研究的热点之一。ASPP2可通过P53依赖或P53依赖途径诱导细胞凋亡，从而抑制肿瘤的形成和发展。然而，最近我们通过5'RACE技术发现了一种新的、被截短的、含有880个氨基酸的ASPP2异构体（ΔASPP2）。初步研究显示ΔASPP2不仅能抑制细胞凋亡，也能抑制细胞自噬，而自噬能明显地影响肿瘤的发生和生存。同时在临床肝癌标本中也发现△ASPP2表达显著增高。然而△ASPP2对ASPP2介导的P53依赖或非P53依赖途径细胞凋亡的机制和对肝癌发生的影响却是空白。本研究将通过ΔASPP2肝组织特异表达小鼠模型，利用分子生物学和细胞生物学技术，探究ASPP2和ΔASPP2表达失衡在肝癌形成和发展中的作用，从而探索肝癌形成新的分子机制，并为寻找肝癌生物治疗靶位提供新的线索。

虽然全长ASPP2对于促进p53依赖性细胞凋亡作用是十分必要的，精确的机制和细胞环境使得这一功能仍然难以捉摸。最近，我们发现一个新的ASPP2异构体（ΔASPP2）可能在调节ASPP2-p53轴上发挥重要作用。因此，本研究旨在调查ASPP2和ΔASPP2表达失衡在肝癌形成和发展中的作用，从而探索肝癌形成新的分子机制。.首先，我们对肝癌组织和癌旁组织中的ASPP2和ΔASPP2的表达情况进行检测，发现ASPP2在肝癌组织中的表达要低于癌旁组织；而ΔASPP2在肝癌组织中的表达要高于癌旁组织。.第二，我们对ASPP2诱导肝癌细胞自噬性凋亡的机制进行研究。我们发现ASPP2过表达可通过诱导自噬性凋亡来引起肝癌细胞死亡；ASPP2能够增强药物诱导的p53非依赖性细胞凋亡作用；ASPP2通过抑制药物诱导的细胞自噬同时促进细胞凋亡；DRAM和CHOP参与ASPP2在诱导自噬性凋亡中的作用。.第三，ΔASPP2能够促进DRAM的表达，可抑制ASPP2诱导的自噬性凋亡。.第四，我们成功构建了ΔASPP2转基因小鼠，并已成功将纯合的RFS-ΔASPP2的小鼠与表达Cre-重组酶的乳清酸性启动子（WAP）-Cre转基因小鼠杂合获得RFS-ΔASPP2/WAP-Cre双重转基因小鼠。利用小鼠以开展ASPP2和ΔASPP2表达失衡在肝癌形成和发展中的作用的研究工作。.第五，敲减肝癌细胞内源性ASPP2的表达促进细胞在体外和体内的增殖；ASPP2过表达对肝癌细胞具有生长抑制作用，并且ASPP2的过表达能够促进索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤作用。.综上，我们的结果揭示了ASPP2和异构体ΔASPP2的表达的失衡与肝癌发生发展的新机制。该研究结果有利于进一步全面研究HCC发展机制。同时我们将继续利用ASPP2缺失型小鼠、ΔASPP2转基因小鼠以及二者杂交产生的ASPP2低表达和ΔASPP2高表达双重转基因小鼠研究ASPP2家族成员在HCC发生发展中的作用。