ASPP2抑制自噬介导的HBV DNA复制的效应及分子机制研究

Infection by Hepatitis B virus (HBV) causes many types of liver diseases in China, and controlling HBV DNA replication is beneficial for controlling chronic HBV infection. Recently some studies have reported that HBV can induce autophagy and then use autophagosome membrane to enhance its DNA replication. Although how autophagy medicates HBV DNA replication is still unclear, inhibition of autophagy is beneficial for eliminating HBV is reported by many studies, suggesting a critical role of inhibition of autophagy in curing HBV infection. Our previous studies have shown that Apoptosis-stimulating protein of p53-2 (ASPP2) has an ability for inhibiting HBV DNA replication and the production of HBV antigens. According these results, we believe that ASPP2 could inhibit HBV infection by inhibiting autophagy-mediated HBV DNA replication. Here, we will study the mechanisms by which ASPP2 inhibits autophagy-medicated HBV DNA replication in cellular and mouse models and then will verify the mechanisms by using clinical samples. So we will know the effect and mechanisms of ASPP2 on inhibiting HBV infection if we finish this study, which is helpful for researching the effect of ASPP2 gene therapy on curing HBV infection in future.

乙型肝炎病毒（HBV）感染是引起国内各种肝脏疾病的主因，控制HBV DNA复制是治疗慢性HBV感染的最佳手段。最近研究显示HBV可以诱导自噬、并利用自噬过程中产生的自噬体膜来促进自身DNA复制。虽然自噬介导HBV DNA复制的分子机制不清，但抑制自噬有利于机体对HBV的清除，提示抑制自噬对HBV治疗具有重要意义。我们前期研究发现p53凋亡刺激蛋白2（ASPP2）能够显著抑制自噬，并对HBV DNA复制、病毒抗原合成和分泌也有明显的抑制能力。因此，我们提出 “ASPP2通过抑制自噬来抑制HBV DNA复制，并最终对HBV感染产生抑制效应”的假说。本课题拟利用细胞和小鼠模型来研究ASPP2抑制自噬介导的HBV DNA复制的相关机制，并在HBV感染患者肝组织标本上验证这一假说，以期阐明ASPP2抑制HBV感染的效应和分子机制，从而为ASPP2基因治疗控制HBV感染的相关研究提供新的研究思路。

乙型肝炎病毒（HBV）感染是引起国内各种肝脏疾病的主因，控制HBV DNA复制是治疗慢性HBV感染的最佳手段。p53凋亡刺激蛋白2（ASPP2）能够显著抑制自噬，并对HBV DNA复制、病毒抗原合成和分泌也有明显的抑制能力。饥饿刺激上调了HBV诱导自噬的水平和增加了HBV复制；但当ASPP2过表达并定位在细胞质时，自噬和HBV复制都被显著抑制，细胞质ASPP2可以通过抑制自噬来减少HBV复制。自噬抑制剂处理HepG2.215后，LC3-II和p62的水平分别出现明显的下调和上调，上清中的HBsAg和HBeAg水平明显下调。过表达ASPP2可明显下调HBsAg和HBeAg的水平，抑制HepG2.215细胞的自噬水平。ASPP2通过与Atg14结合而抑制HepG2.215细胞的自噬。通过共转染HBx和ASPP2质粒，HBx诱导自噬流的进行，而ASPP2的过表达可以在自噬体膜“延长和闭合”期抑制由HBx诱导的自噬流的发生。ASPP2在细胞的G0/G1期协同K18将14-3-3ζ封闭于胞质中，抑制了14-3-3ζ对其细胞周期蛋白的封闭作用，从而抑制了细胞周期的进程和肿瘤的发生发展。在p53缺失及HBs Ag+的HepG3B细胞中，ASPP2主要通过影响细胞周期抑制细胞的增殖。而在p53野生型及HBs Ag-HepG2细胞中，ASPP2通过影响细胞凋亡抑制细胞的增殖。研究表明，ASPP2在肝细胞癌组织中低表达，通过促进细胞凋亡等多种机制抑制肿瘤的发生发展。基于CRISPR/Cas9系统成功构建ASPP2基因敲除小鼠，ASPP2基因敲除小鼠DEN诱导的肝癌模型明显高于野生型。阐明了ASPP2 对HBV DNA复制、病毒抗原合成和分泌、肝细胞自噬和凋亡的影响；表明了ASPP2抑制肿瘤的发生发展，从而为ASPP2基因控制HBV感染和治疗肝癌提供新的研究思路。