麦胚凝集素修饰的固体脂质纳米粒递送NR2B9c经鼻入脑治疗缺血性脑卒中的实验研究

NR2B9c是一种极有临床应用前景的治疗缺血性脑卒中的多肽，目前相关研究集中在作用机制方面，且实验中均由源自HIV的Tat携带NR2B9c透过血脑屏障。由于Tat在安全性方面存在很大问题，为将NR2B9c高效安全的递送入脑，我们利用麦胚凝集素可与鼻腔嗅粘膜上选择性高表达的N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的原理，构建了新型的鼻用麦胚凝集素修饰的NR2B9c固体脂质纳米粒。本课题对该递药系统鼻腔给药的脑内递药特性进行了研究，并考察其对局部缺血性脑损伤的神经保护作用。本课题还以光稳定性好的量子点作为荧光探针，探讨了麦胚凝集素修饰的固体脂质纳米粒经鼻入脑的转运机理，为后续递药系统的设计提供有益参考。本课题首次将磷脂复合物应用到固体脂质纳米粒的制备中，提高了水溶性药物的包封率和载药稳定性，此法优于现有的制备方法。本研究对其它具有中枢治疗作用的多肽蛋白类药物亦有一定借鉴作用。

NR2B9c是一种极有临床应用前景的治疗缺血性脑卒中的多肽，目前有关NR2B9c的研究集中在药理作用机制方面，且实验中均由来自于HIV的Tat携带NR2B9c透过血脑屏障。本课题组首次对NR2B9c的基本理化性质进行了研究，建立了体外分析测试方法，为NR2B9c的进一步研发提供了基础。由于Tat在安全性方面存在很大问题，为将NR2B9c高效安全的递送入脑，我们利用Odorranalectin可与鼻腔嗅粘膜上选择性高表达的L-岩藻糖特异性结合的原理，构建了新型的鼻用Odorranalectin修饰的NR2B9c固体脂质纳米粒，优化后的固体脂质纳米粒为类球形粒子，表面光滑，大小均一，分布均匀，平均粒径148.3nm，PI值为0.177，Zeta电位为-30.26 mV，包封率为67.25%，载药量为1.18 % ；冻干保护剂选用3.75%的蔗糖；物相分析证明了载药纳米粒的形成。NR2B9c被制成固体脂质纳米粒后，其在血浆和鼻洗液中的稳定性显著提高，且呈现出了明显的缓释效应。红细胞凝集试验表明连接在纳米粒表面的Odorranalectin仍然保持其生物活性，证实采用的连接方法得当。以香豆素-6作为荧光探针，选用Calu-3鼻粘膜细胞模型，摄取实验结果表明经Odorranalectin修饰的固体脂质纳米粒能更多的被细胞摄取；体内分布结果表明Odorranalectin修饰的固体脂质纳米粒鼻腔给药后脑部递药能力强于未修饰组，包载于Odorranalectin修饰的固体脂质纳米粒中的香豆素-6的脑内平均Cmax、 AUC0-8h分别是未经修饰的固体脂质纳米粒的1.91、1.34倍，并且Odorranalectin修饰的固体脂质纳米粒的脑靶向效率高于未修饰组。Odorranalectin修饰的NR2B9c固体脂质纳米粒对NMDA所造成的神经元损伤具有一定的保护作用，其效果优于NR2B9c固体脂质纳米粒和NR2B9c；Odorranalectin修饰的NR2B9c固体脂质纳米粒鼻腔给药可减少暂时性局部脑缺血模型大鼠的脑梗死面积，并改善神经功能缺陷。这些都反应了Odorranalectin修饰的固体脂质纳米粒，是经鼻给药的一种优良载体，其可为NR2B9c提供了一种安全有效的脑部递药方法，本研究对其它具有中枢治疗作用的多肽蛋白类药物亦有一定借鉴作用。