LncRNA ST20-AS1激活NOTCH通路促进T细胞淋巴瘤进展的机制和靶向干预研究

Relapsed or resistant to conventional chemotherapy, T-cell lymphoma progresses rapidly with a poor prognosis. Activation of NOTCH pathway enhancing proliferation of lymphoma cells, as well as angiogenesis, plays an important role in T-cell lymphoma progression. Our previous research of lncRNA and mRNA expression array, demonstrated that lncRNA ST20-AS1 was overexpressed in T-cell lymphoma, resulting in activation of NOTCH signaling pathway. ST20-AS1 expression of T-lymphoma cells significantly correlated with NOTCH1、DLL4 VEGF and ICAM1 expression. Further luciferase repoter would be used to verify the possible mechanism of ST20, the anti-sense strand of ST20-AS1, regulating NOTCH1 expression. Based on the results of our previous work, the aim of this study is to clarify the profile of ST20-AS1 and the relationship of NOTCH activation, as well as the association with tumor progression and resistance. We will also explore the potential therapeutic approach of NOTCH pathway inhibition. These results could be helpful to elucidate the mechanism of the tumor-microenvironment crosstalk on chemoresistance and to develop novel targeted therapy strategy in T-cell lymphoma.

T淋巴瘤进展迅速，化疗耐药，患者预后差。NOTCH通路的异常激活，与T淋巴瘤的高增殖和耐药相关，而临床靶向治疗困难。我们前期通过lncRNA和mRNA表达芯片的高通量检测，发现lncRNA ST20-AS1在T淋巴瘤细胞中高表达，并激活NOTCH通路，其表达与NOTCH1、DLL4的表达成正相关，而且还与该通路下游的微环境相关分子，如VEGF、ICAM1的高表达显著相关。通过序列的靶向预测发现，ST20可与NOTCH1基因的3‘非翻译区结合，本研究将进一步通过Luciferase reporter等试验来验证ST20对NOTCH的调控机制。本课题为前期工作的延续和深化，旨在明确T细胞淋巴瘤中ST20-AS1对NOTCH的调控机制，以及与肿瘤进展及耐药的内在联系，不仅为临床分层治疗提供客观依据，而且还将通过研究对干预NOTCH通路对淋巴瘤进展和耐药的影响，开拓相应的靶向治疗策略。

T细胞淋巴瘤是侵袭性淋巴瘤的重要类型之一。T细胞淋巴细胞恶性肿瘤往往呈高度侵袭性，常规化疗仍是现今主要的治疗手段，患者常迅速对化疗药物产生耐药，易复发转移，疾病反复，预后不良。最近的报道显示，长链非编码 RNA（long non-coding RNAs, lncRNAs）能够调节肿瘤的相关信号通路，在肿瘤发生中起重要作用，能够促进肿瘤增殖、侵袭以及血管增生等生物学过程。. 本课题组前期利用lncRNA芯片筛选出与T细胞淋巴瘤密切相关的lncRNA，并进一步研究其在T淋巴瘤中的功能。本研究从临床标本、细胞、动物三个层面阐明了lnc_SETD7在T细胞淋巴瘤中的功能及作用机制。临床层面，通过检测正常对照组、初发组、治疗后完全缓解组及复发组T淋巴瘤患者血清，我们发现患者初发时及复发时血清中lnc_SETD7的表达均显著高于疾病经治疗完全缓解后血清中的表达，提示血清lnc_SETD7可用于检测T细胞淋巴瘤患者疾病状态。进一步分析发现lnc_SETD7高表达和T细胞淋巴瘤患者化疗耐药及预后不良有关。细胞层面，在T淋巴瘤细胞中敲低lnc_SETD7可使细胞侵袭能力和增殖能力显著减弱，G1/G0期细胞显著增加，S期细胞显著减少。提示lnc_SETD7在T细胞淋巴瘤中扮演类似促癌基因的角色。机制方面，本课题组对T细胞淋巴瘤患者的肿瘤组织进行了RNA-seq测序。生物信息学分析显示，lnc_SETD7高表达组主要与TGF-β通路和细胞黏附相关通路激活有关。通过RNA pull-down等实验，我们发现lnc_SETD7可稳定结合蛋白HNRNPD和YBX1。HNRNPD和YBX1可结合TGF-β通路上关键基因TGFBR1和TGFB2基因的启动子序列，促进TGFBR1和TGFB2基因的转录。这些结果表明，lnc_SETD7作为HNRNPD/YBX1复合物的分子支架，三者形成三联体共同作用于TGF-β通路而发挥功能。动物层面，体内实验结果与体外实验结果一致，lnc_SETD7具有促进T淋巴瘤增殖、侵袭的作用。. 通过本课题资助，还完成了复发难治淋巴瘤的治疗疗效和现状分析。结果说明DLBCL患者一旦复发，患者的生存时间大大缩短，2年生存仅30%。并且对于复发方案无效的患者，中位总生存时间仅19个月。因此，对于淋巴瘤耐药的分子的靶向治疗，或通过新的分子，早期识别易复发的患者非常重要。