体外转化的双阴性调节T细胞对B细胞的调控机制及其在小鼠慢性排斥反应模型中的应用研究

Double Negative Regulatory T cells(DN Treg) are a class of immune regulatory cells which play an immportant role in transplant immunology,but few are known its role in choric rejection.Our previous study firstly found that CD4+CD25- effector T cells(Teff)in vitro can be converted to DN Treg by appropriate conditions. The transformed DN Treg has a strong inhibitory effect on Teff cells. This project will further study the optimal converting condition of CD4+ Tcells into DN Treg and mechanisms between DN Treg and B cells in immune regulation. Explore the effect in mouse chronic rejection models by transfuse DN Treg cells in vivo and observe its effects on graft. Meanwhile, we attempt to combine DN Treg and other immunosuppressants such as rapamycine to prevent chronic rejection in order to find a potential therapeutic strategy for chronic rejection.

双阴性调节T细胞（Double Negative T Regulatory Cell, DN Treg）作为一类免疫调节细胞在移植免疫中所发挥的作用已经越来越多的被人们所认识，但在慢性排斥反应中的作用还未得知。在前期的研究中我们首次发现CD4+CD25-效应T细胞（T effector cell, Teff）在体外通过适当的条件能转化为DN Treg，这种转化的DN Treg 对Teff有强大的抑制作用。本项目将进一步研究CD4+Teff 细胞在体外转化为DN Treg的最适条件，同时在体外、体内两个层面研究DN Treg对B细胞的免疫调节作用及相关机制，在小鼠慢性排斥反应模型中通过回输体外转化的DN Treg细胞来观察其对移植物的影响，并尝试通过联合应用DN Treg与免疫抑制剂来延缓慢性排斥反应的发生，以期进一步深入认识慢性排斥反应的发生机制，为慢性排斥反应寻找一种可能的治疗策略。

项目背景和主要研究内容：在生理状态下，人和小鼠外周淋巴细胞群内约有1～5%表型为CD3+CD4-CD8-TCRαβ+双阴性T细胞（Double negative T cells，DN T cells）。这种DN T细胞具有免疫调节功能，是诱导外周免疫耐受的重要细胞。此前的研究发现：运用IL-2能将CD4+T细胞在体外转化成双阴性T细胞（converted DN T，cDN T）。这种cDN T细胞有着与体内DN T细胞相似的表型和相近的功能，是体内DN T细胞应用的补充和延伸。目前关于cDN T细胞对B细胞功能及其作用机制仍然不是很清楚。因此本研究主要研究内容是：通过优化转化条件以提高转化效率获得更多的cDN T细胞，并检测其表型，以及研究其在体内对B细胞介导的免疫反应中的作用和机制。.重要结果：（1）cDN T细胞最优转化条件：提前铺CD11c+CD86+MHC IIlo/-BMDC细胞，6~8小时后再铺上新鲜的CD4+CD127+CD25-T细胞可以进一步提高cDN T细胞的转化率，达到85.2%；（2）cDN T细胞在体内对B细胞作用：①cDN T细胞抑制体内B细胞增殖和活化；②cDN T细胞抑制骨髓内B细胞成熟和脾脏B细胞IgM分子类别转换；③cDN T细胞抑制脾脏和淋巴结浆细胞的产生；④cDN T细胞抑制体内自体反应性B细胞分泌各种型别抗体；⑤cDN T细胞诱导体内产生更多的粒系骨髓来源的抑制性细胞（gMDSC）。.重要结论及其科学意义：使用状态稳定且MHC II分子表达低的成熟BMDC和CD4+CD127hiCD25-T细胞作为转化对象能进一步提高cDN T细胞转换效率。据此转化的cDN T细胞兼具NK细胞和Tfh细胞双特性，可能是一种不成熟的NK-Tfh样细胞。这种转化的NK-Tfh样细胞能抑制体内B细胞的增殖、活化、成熟和抗体同型转换，以及浆细胞的产生和自体反应性B细胞的抗体分泌。这种抑制作用可能通过诱导体内产生更多gMDSC实现。这些发现可为未来研究cDN T细胞在移植慢性排斥反应中作用打下工作基础和NKT细胞可能的发育途径提供模型。