天疱疮皮损异位淋巴结构的形成及长链非编码RNA调控机制的研究

Ectopic lymphoid structure (ELS) is a localized cluster or structure of aggregated immune cells in chronic inflammation, which exists in a variety of target organs of autoimmune diseases, such as rheumatoid arthritis and Sjogren's syndrome. ELS could provide specific sites for autoreactive B cells to be mature, be activated, and further to produce autoantibodies, which contributes to exacerbate local immune pathological reactions. Pemphigus is a severe autoimmune bullous skin disease, and the mechanism that how local skin lesions form is not clear. Clinically, we find that the topical therapy on skin lesions is effective, and could reduce the side effects of the long-term systemic application of glucocorticoid. In the previous study we also find that pemphigus lesions harbor immune cells, which underlie ELS; autoreactive B cells could be differentiated and produce specific autoantibodies; and multiple associated long chain noncoding RNAs (lncRNAs) showed differentially expression. In this study, we will explore the process of local ELS formation and autoreactive B cell maturation in pemphigus lesions, and screen the differentially expressed lncRNAs, and elucidate the specific regulation mechanism. Our study will enrich the mechanisms of pemphigus lesions, lay a foundation of experimental basis of topical therapy in pemphigus, and help to further explore new biology diagnostic markers and new targeted therapy of pemphigus.

异位淋巴结构（ELS）是病理情况下局部免疫细胞聚集所形成的团块状结构，存在于多种自身免疫病的靶器官，如类风关、干燥综合征等。ELS可提供特定的场所使自身反应性B细胞成熟、活化，并产生自身抗体，参与或加剧局部免疫病理反应。天疱疮是一危重的自身免疫性大疱病，局部皮损的加重和复发机制尚不明了。本课题组在临床上发现针对皮损的外用治疗具有良好的疗效，降低长期大剂量系统使用糖皮质激素的副作用；在实验中发现天疱疮皮损局部存在免疫活性细胞，形成ELS；自身反应性B细胞可活化产生特异性自身抗体；且多个相关长链非编码RNA（lncRNA）较正常有差异性表达。本研究将在前期工作的基础上，探索天疱疮皮损ELS的形成及自身反应性B细胞成熟活化的过程，筛选差异表达的lncRNAs，明确其具体调控机制。通过本研究，将丰富天疱疮皮损的形成机制，夯实天疱疮外用疗法的理论基础，进一步研发新的生物学诊断标记及新的靶向治疗药物。

天疱疮是一种由自身抗体介导、严重危及生命的器官特异性自身免疫性疾病。经典循环抗体致病理论认为抗桥粒芯糖蛋白（Dsg1/Dsg3）循环抗体作用于表皮角质形成细胞的桥粒结构，导致皮肤黏膜的水疱糜烂，但难以解释临床中患者皮损不均匀分布、原位复发等诸多现象。异位淋巴结构ELS是在感染、自身免疫病、肿瘤等病理情况下淋巴细胞和髓样细胞的异常聚集，在自身免疫病靶器官局部发挥免疫龛的作用：为抗原呈递、特异性T、B细胞活化、分化、各类生发中心反应等提供免疫微环境。.本项目对天疱疮患者皮损处ELS的形成和功能以及局部自身反应性B细胞的成熟、活化、分化和产生抗体的机制进行深入研究，并对患者皮损及外周血lncRNAs转录调控的表观遗传学特征及其可能机制进行探讨。.天疱疮皮损局部普遍存在ELS结构，以混合浸润的T、B细胞团块状聚集为主，伴有CD138+浆细胞和MECA79+HEV样血管等；皮损ELS中存在不同分化阶段的B细胞，可在体外产生天疱疮特异性抗体；皮损局部CD4+TRM具有Tfh样细胞表型和功能，可辅助B细胞产生天疱疮抗体。通过单细胞转录组和免疫组库测序构建皮损B细胞的发育轨迹，利用测得的扩增皮损浆细胞BCR克隆序列体外合成Dsg1/3特异性抗体，通过KC细胞解离、ELSIA及新生鼠模型实验证实其具有致病性。天疱疮体内存在多种差异性表达的lncRNA，外周血中ENST00000585297表达与治疗所需激素剂量呈正相关，lncRNA NR_111970与天疱疮疾病面积指数（PDAI）及抗Dsg1抗体滴度呈正相关。而皮损单个核细胞中lncRNA及mRNA差异基因富集通路包括肽链交联、角化、表皮发育等，患者高表达lncRNA ENST00000326341和NR_038332。.本项目对天疱疮皮损ELS的研究在国际上首次提出了天疱疮皮损局部抗体致病理论，作为对天疱疮循环抗体致病理论的重要补充，打开了通往天疱疮自身免疫病理新机制的大门，也为皮损的局部固定、复发、难治以及外用药物的局部治疗提供了理论依据。对与天疱疮疾病诊断、严重程度相关的lncRNA的发现和验证，从表观遗传学和分子生物学的层面更为深入地认识了疾病，也为天疱疮的诊治提供了新的诊断标志物和治疗靶点。