PGRMC1蛋白在肾癌中的功能及作用机理研究

孕酮受体膜组分１蛋白（PGRMC1)在多种肿瘤组织和肿瘤细胞系中高表达，PGRMC1有助于肿瘤的生存和发展，PGRMC1可能是指示肿瘤进展的潜在标志物和治疗肿瘤的潜在靶标分子。我们前期已鉴定磷酸化PGRMC1蛋白在肾癌中高表达，并鉴定了Tyr113和Thr74两个新磷酸化位点。但目前对PGRMC1蛋白及其磷酸化在肿瘤细胞中介导的信号转导通路与调控机理并不清楚。本课题将运用Leu-d3标记的定量蛋白组学和稳定过表达、RNA干扰，点突变和模式生物等技术手段，从蛋白磷酸化与肿瘤关系的角度，分析PGRMC1蛋白异构体表达/磷酸化状态与肾癌中雌激素/孕酮受体状况之间的关系，阐明PGRMC1相互作用蛋白与PGRMC1磷酸化/去磷酸化调节的信号通路，以及PGRMC1磷酸化介导的孕酮诱导肾癌细胞凋亡的信号通路及其调控机理。研究结果有助于理解PGRMC1蛋白在肿瘤中的生物学功能及调控机制与肿瘤发生的关系。

本课题在试验结果和研究成果等方面均表现优秀取得良好结果，圆满完成任务。课题采用稳定同位素细胞标记的质谱（SILAC-MS）的定量蛋白质组学方法，首次鉴定到孕酮受体膜组分１蛋白（PGRMC1)蛋白在肾癌与癌旁组织中表达差异显著，还鉴定到肾癌中PGRMC1 蛋白Thr74残基的磷酸化位点。首次分析了肾癌中PGRMC1蛋白的相对表达水平与肾癌临床分级的关系，发现PGRMC1蛋白的表达水平与肾癌发展具有临床相关性，PGRMC1 蛋白在肾癌中普遍上调，该蛋白高表达与肾癌肿瘤恶性程度的Fuhrman 等级和低分化相关（p<0.05）、但与性别无关。进一步采用过表达、氨基酸定点突变及化学小分子探针等研究技术首次揭示了PGRMC1蛋白参与调节肾癌细胞生长的分子机制，即肾癌中PGRMC1蛋白及其磷酸化水平都是过表达，PGRMC1蛋白能通过其自身的磷酸化水平来调节AKT介导的肾癌细胞生长增殖；当小分子化学药物索拉菲尼作用于肾癌细胞，药物能与PRGMC1蛋白相互作用，通过影响PRGMC1蛋白的磷酸化、从而影响AKT的磷酸化及其信号通路来调节肾癌细胞生长。主要研究结果已总结成文投稿到生物化学蛋白质组学领域顶级权威期刊 Mol Cell Proteomics（MCP, IF8.35）、文章一审结果同意修改，现修改版本已提交。. 本课题以第一或通讯作者已在Proteomics、Journal of Translational Medicine、Proteome Science、Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening发表标注本项目资助的SCI文章5篇和1篇MCP已投修回文章，还参编1本英文专著《Molecular Targets of CNS Tumors，培养研究生6名（其中毕业博士/硕士3人）。负责人还积极参加国内外有关学术交流，并多次受邀做大会学术报告。如2010年7月应深圳华大基因研究院邀请参加中华复杂疾病研究大会学术大会,做大会学术报告。2012年8月参加中国生物化学与分子生物学学会主办的“2012年全国生物化学与分子生物学学术大会”，提交论文摘要获优秀墙报奖一等奖。