祛风及开窍类引经中药对药物眼靶向性作用的影响及机制

内治法是中医眼科的重要治疗手段，如何提高全身用药后药物有效成分在眼部的靶向性作用以提高临床疗效，是我们现代中医眼科医师面临的问题和挑战。引经药是中药方剂的重要组成部分，在处方中具有引导其它药物的药力直达脏腑、经络或病变部位，使药效集中，从而提高疗效的作用，该作用与现代制药理论的靶向性作用十分类似，显示出中医用药理念的先进性，但目前引经药的作用途径、作用机制尚不清楚，尤其在眼科中的应用研究还十分缺乏。因此，本课题拟以祛风药防风及开窍药冰片作为引经药，六味地黄丸做为代表方，碘酸钠诱发的视网膜色素变性模型为研究对象，采用药代动力学、药效及药理学的研究技术，观察加入引经药后组方中有效成分在眼内分布的改变，药物作用微环境的变化以及疗效的变化，全面探讨引经药作用的物质基础和作用机制。该项研究不仅对于中医眼科临床用药具有重要的指导价值，而且对现代眼科靶向制剂的设计亦具有启发和推动作用。

研究目标：采用药效学、药理学及药代动力学技术探讨祛风及开窍类中药在眼病药物治疗中发挥引经药作用的物质基础和作用机制。.研究方法：以碘酸钠诱导的视网膜损伤模型作为研究对象，采用病理学技术及Tunel方法观察六味地黄丸、六味地黄丸+冰片、六味地黄丸+防风对视网膜损伤的保护作用；采用免疫组化技术及Western blot方法观察加入引经药后对正常血-视网膜屏障Claudin-5蛋白表达量及表达位置的改变，探讨冰片及防风是否是通过一过性地影响Claudin-5蛋白的表达从而促进血-视网膜屏障生理性开放；采用高效液相色谱法-串联质谱法（LC-MS法）观察加入引经药冰片及防风后对六味地黄丸在血清中有效成分的影响及眼部不同组织分布和代谢的影响。 .研究结果:.1. 碘酸钠可导致大鼠视网膜色素上皮层和外核层损伤，40mg/kg NaIO3浓度造模最适宜药物评价。各治疗组对碘酸钠所致的视网膜病理损伤有不同程度的保护作用，并可减少视网膜色素上皮细胞和感光细胞的凋亡，其中以六味地黄丸+防风的作用最好。.2．免疫组化观察Claudin5表达于视网膜及脉络膜血管内皮细胞，各组之间比较，灌胃后30 分钟-2小时表达量由多至少分别为：蒸馏水组>六味地黄丸组>防风组>冰片组；灌胃4小时及8小时后各组之间阳性细胞分布及染色程度无明显差异。 .3. Western Blot结果显示灌胃后 0.5h，各组之间claudin-5蛋白表达量比较趋势为：冰片组<防风组<蒸馏水组<六味地黄丸组；灌胃后1h，各组claudin-5蛋白表达量比较为防风组<冰片组<六味地黄丸组<蒸馏水组；灌胃后2h，claudin-5蛋白表达量增幅冰片组<防风组<六味地黄丸组<蒸馏水组；其他时间无明显差异。.4. LC-MS法检测发现冰片组的莫诺苷、马钱苷、芍药苷的血药浓度在0.25h~2h均较六味组、防风组、柴胡组高，差异均有统计学意义（P<0.05）。房水检测发现冰片组的马钱苷、莫诺苷的浓度在0.25h~0.75h均较六味组、防风组、柴胡组高，差异有统计学意义（P<0.05）。玻璃体检测发现冰片组的莫诺苷浓度在0.25h~0.75h均较六味组、防风组、柴胡组高，差异有统计学意义（P<0.05）；视网膜检测发现冰片组的马钱苷、莫诺苷、芍药苷的浓度在0.25h较六味组、防风组、柴胡组高，差异有统计学意义(p<0.05)