黄花蒿内生曲霉来源的肿瘤细胞多药耐药ardeemins类逆转剂研究

肿瘤细胞多药耐药性（MDR）是导致肿瘤化疗失败的重要原因之一，寻找天然、高效、安全MDR逆转剂具有重要的价值和意义。ardeemins是一类具有逆转肿瘤细胞MDR作用的生物碱。本项目以一株代谢ardeemins的黄花蒿内生曲霉As1为研究对象，通过响应曲面优化试验确定其最佳发酵工艺条件，并放大生产1000L。采用现代色谱技术（Gel CC、HSCCC、IE CC、制备HPLC等）快速有效分离和制备ardeemins类化合物，结合波谱技术（NMR、MS、IR和UV）以及单晶衍射技术等解析该类物质的构型。利用经典有机化学反应，以分离的ardeemins类物质为底物，合成一系列ardeemins类衍生物，如卤代产物、醚化产物、酯化产物等。采用MTT法测试所有ardeemins类化合物的MDR逆转作用，研究其构效关系，以期发现活性显著的肿瘤细胞MDR逆转剂。

肿瘤细胞多药耐药性（multidrug-resistant resistance, MDR）是导致肿瘤化疗失败的重要原因之一，寻找天然、高效、安全MDR逆转剂具有重要的价值和意义。本项目以一株代谢ardeemins的黄花蒿内生曲霉SPS-02(原始编号As1)为研究对象，通过18S rRNA分子鉴定，确定为Aspergillus fumigatus。采用现代色谱技术，分离到ardeemin类化合物四个，通过波谱技术研究，确定这四个化合物结构分别是5-N-acetylardeemin（1）、5-N-acetyl-15bß-hydroxyardeemin（2）、5-N-acetyl-15b-dehydroardeemin（3）、5-N-acetyl-16α-hydroxyardeemin（4）。同时，该菌株次生代谢产物研究中还得到了另一种生物碱methyl-3,4,5-trimethoxy-2-[2-(nicotinamido)benzamido]benzoate。以化合物2和4为底物进行氯代反应，合成其氯代产物，但三次试验都没有预期产物。利用MTT法，研究了四种ardeemin类化合物1-4逆转三株MDR肿瘤细胞（人肺腺癌/顺铂耐药细胞A549/DDP、人卵巢癌/顺铂耐药细胞SK-OV-S/SSP和白血病阿霉素耐药细胞K562/ADR）活性，试验结果表明，化合物2具有最佳的逆转SK-OV-S/DDP肿瘤细胞活性，逆转倍数RF值为10.8 ± 0.28倍，且化合物4逆转K562/DOX和A549/DDP肿瘤细胞效果最好，RF值分别为5.2 ± 0.18倍, 8.2 ± 0.23倍；初步构效关系表明，化合物2和4具有羟基，能与靶点很好结合起到很重要作用。进一步分子对接研究，发现化合物4与靶点P-糖蛋白中833位Phe通过苯环大π键相互作用，形成较稳定的结合构象，发挥着逆转肿瘤细胞MDR作用。因此，化合物4有望进一步开发成MDR肿瘤细胞逆转剂。通过本项目的研究，目前已正式发表论文3篇（其中SCI类2篇），正在接受1篇，专利申请1项，完成了预期研究成果。