蛋白磷酸酶4(PP4)通过核因子-κB通路调控泌乳素瘤多巴胺抵抗的机制研究

Resistance to dopamine agonists in prolactinoma is correlated with reduction of dopamine D2 receptor expression levels. Our study showed that protein phosphatase 4 (PP4) was highest expression in proalctinoma by gene profiling technique, suggesting that PP4 might be involved in the pathogenesis of prolactinoma.Recently, our study showed that PP4 could regulate the dopamine D2 receptor expression via NF-κB pathway in prolactinoma MMQ cells. Our preliminary study showed that PP4 also could regulate filamin A expression. Recently reported in the literature, filamin A could regulate prolactinoma dopamine D2 receptor expression, and filamin A also could regulate NF-κB pathway. So the PP4 - - filamin A - - NF-κB pathway might exist, and regulate dopamine D2 receptor expression. Therefore, the aim of our study is to establish human dopamine agonist-resistant prolactinomas cell lines, and then study how the PP4- - filamin A- - NF-κB pathway regulates dopamine D2 receptor expression using gene transfection, siRNA interference and other techniques. Furthermore, the possible compounds regulating dopamine D2 receptor expression will be expected to be found by high throughput drug screening, and this study can provide new ideas for prevention and treatment of dopamine agonist-resistant prolactinoma.

泌乳素瘤多巴胺抵抗与细胞表面多巴胺D2受体表达关系密切。本课题组早期泌乳素瘤基因表达谱分析显示蛋白磷酸酶4(PP4)最高表达，提示其可能参与泌乳素瘤的发病，近期本课题组在大鼠泌乳素瘤MMQ细胞中研究显示PP4可通过NF-κB通路调控泌乳素瘤细胞表面多巴胺D2受体表达。本课题组近期初步研究显示PP4可能也可调控细丝蛋白A表达，最近文献报道细丝蛋白A可调控泌乳素瘤多巴胺D2受体表达，并且细丝蛋白A可与NF-κB发挥作用，故此我们设想存在PP4- - 细丝蛋白A- - NF-κB通路调节泌乳素瘤多巴胺受体表达。本课题拟建立人的多巴胺抵抗的泌乳素瘤细胞系，然后应用基因转染和siRNA 干扰等技术深入研究PP4- - 细丝蛋白A- - NF-κB通路调节泌乳素瘤多巴胺D2受体表达，并期望通过高通量药物筛选技术筛选到可能发挥调控的化合物，为泌乳素瘤多巴胺抵抗防治提供新思路。

1. 研究背景：.泌乳素瘤多巴胺抵抗与细胞表面多巴胺D2受体表达关系密切。本课题组早期泌乳素瘤基因表达谱分析显示PP4高表达，在大鼠泌乳素瘤MMQ细胞中PP4可通过NF-κB通路调控泌乳素瘤细胞表面多巴胺D2受体表达，PP4可能也可调控细丝蛋白A表达，文献报道细丝蛋白A可调控泌乳素瘤多巴胺D2受体表达，并且细丝蛋白A可与NF-κB发挥作用，故此我们设想存在PP4-细丝蛋白A-NF-κ B通路调节泌乳素瘤多巴胺受体表达。.2. 主要研究内容：.通过过表达和干扰表达技术，在大鼠和人的泌乳素瘤细胞系研究PP4-细丝蛋白A-NF-κ B通路调节泌乳素瘤多巴胺受体表达。.3. 主要研究结果：.(1) 建立泌乳素瘤研究模型：.课题组采用雌激素干预的方法，成功构建大鼠泌乳素瘤模型，为后续研究提供了有效的实验工具。.(2) 泌乳素瘤D2R的调控研究：.1）前期工作曾投稿，审稿专家建议不同细胞系验证PP4对泌乳素瘤细胞D2R的调控。遂课题组在动物及细胞水平反复验证，结果差异较大，多数结果提示PP4基因对泌乳素瘤细胞的PRL分泌调节影响小，且PP4不能调控D2R。.2）课题组继续深入研究曾探索的BTBD10新基因，结果显示BTBD10在大鼠泌乳素瘤中高表达；细胞水平过表达和抑制表达BTBD10研究显示D2R表达分别下调和上调。.(3) BTBD10调控泌乳素瘤D2R表达的机制.1）利用免疫共沉淀及质谱分析BTBD10相互作用蛋白，包括转录因子BCLAF1。.2）BCLAF1在泌乳素瘤中低表达，生物信息学预测其可直接作用于PRDM2(文献报道其可调控D2R)。.3）利用大鼠泌乳素瘤及正常垂体，进行全基因组基因芯片分析，与文献比对，一致上调及下调的表达基因18个。.(4) 泌乳素瘤的临床诊断及治疗.1）胃复安兴奋试验在高泌乳素血症中病因诊断中有益。.2）经蝶鞍垂体瘤切除术对育龄期女性患者生殖功能恢复可能是一种重要治疗手段。.3）针对全国不同省市的内分泌科医师泌乳素瘤的问卷调查显示存在一些认识差别，需要加强培训。.4. 主要科学意义：.课题组在动物及细胞水平反复验证PP4调控泌乳素瘤的D2R表达，结果差异较大，但是保证了科学的严肃性。在动物和细胞水平证实了BTBD10可以调控泌乳素瘤D2R表达，并且研究其相互作用蛋白，提示BCLAF1为重要调控靶点，为深入探索泌乳素瘤D2R调控迈出重要一步。