戊型肝炎病毒开放读码框3蛋白通过核因子-kappa B信号通路对巨噬细胞极化的调控

Cases of chronic hepatitis E and liver cirrhosis induced by hepatitis E virus have been reported,but its mechanism is not clear enough.In our prophase research, we have found that hepatitis E virus open reading frame 3 (HEV ORF3)can inhibit the secretion of IL-1β and TNF-α of macrophage inudced by lipopolysaccharide. And this phenomenon maybe caused by HEV ORF3 regulating NF-κB signal pathway. In this subject, we hope to study the effect of HEV ORF3 on macrophage through NF-κB and its mechanism: (1)To observe how HEV ORF3 influence the secretion of pro-inflammatory cytokine and anti-inflammatory cytokine, phagocytosis, chemotaxis and angtigen presentation; (2)In order to study the reactivity of macrophage receive stimulation, we will observe effect of HEV ORF3 on transcription and translation of pattern recognition receptors such as TLR3, TLR4, RIG-I and MDA-5 expressed in macrophage; (3)In order to screen the molecules that participate in modulation of macrophage by HEV ORF3, we will also observe the expression and transport process of key molecules of NF-κB signal pathway such as Iκκ1, Iκκ2, IκB, RelB, p50, p52 and p65.

戊型肝炎可慢性化、加速肝硬化进展，目前机制不清。我们前期研究发现戊型肝炎病毒开放读码框3(HEV ORF3)蛋白可抑制LPS诱导巨噬细胞分泌促炎因子IL-1β和TNF-α，并进一步发现其可能是通过调控NF-κB实现该作用。本项目拟研究HEV ORF3对巨噬细胞功能的影响，及通过NF-κB调控巨噬细胞功能的机制：（1）通过检测HEV ORF3对巨噬细胞产生促炎和抗炎细胞因子的分泌、吞噬功能、趋化作用和抗原提呈来探讨其对巨噬细胞功能的影响；（2）检测转染HEV ORF3对巨噬细胞模式识别受体TLR3、TLR4、RIG-I、MDA-5的转录、翻译水平，探讨其对巨噬细胞接受刺激信号的影响；（3）观察HEV ORF3对巨噬细胞NF-κB通路关键分子Iκκ1、Iκκ2、IκB、RelB、p50、p52和p65的表达及转运过程探筛选出参与HEV ORF3调控巨噬细胞功能的分子，以进一步阐明其调控机制。

戊型肝炎（Hepatitis E, HE）可慢性化，进而导致肝硬化，目前机制不清。戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus, HEV）开放读码框（Open Reading Frame, ORF）3蛋白目前功能不清，被发现主要参与信号通路调节。既往的研究主要集中于HEV ORF3对肝细胞增殖的调控，发现其可以促进肝细胞存活，维持感染。本研究从机体天然免疫重要组成部分巨噬细胞入手，试图从免疫学角度阐述HEV慢性化感染的机制。基于前期我们发现HEV ORF3蛋白可能通过抑制NF-kB信号通路中P65的核转位来下调LPS介导THP-1巨噬细胞表达TNF-a和IL-1b，提示HEV ORF3对巨噬细胞的免疫抑制作用。因此，本研究拟系统全面的阐述HEV ORF3蛋白对巨噬细胞免疫功能的影响和对巨噬细胞免疫功能最为重要的NF-kB通路的调控机制，按以下三个方面内容进行研究：1、HEV ORF3蛋白对THP-1巨噬细胞的免疫功能的影响，包括炎症反应、趋化作用、吞噬功能等；2、作为天然免疫的重要组成部分，HEV ORF3是否对巨噬细胞的同HEV感染相关的模式识别受体有影响；3、HEV ORF3如何调控NF-kB通路的信号转导来抑制其由LPS介导的活化。获得如下科学进展：1、HEV ORF3能够从转录层面抑制巨噬细胞产生TNF-a，IL-1b，IL-6，IL-12等促炎因子，而上调TGF-b，IL-10等抗炎细胞因子；2、HEV ORF3能够抑制LPS诱导的趋化因子如MCP-1，IL-8，NO；3、HEV ORF3可能通过下调FcrR, CD14的表达和Rac1/Cdc42的磷酸化来抑制其吞噬功能；4、HEV ORF3能够下调多种模式识别受体的表达，如TLR3，TLR4和TLR7；5、HEV ORF3通过抑制Ikk、IkBa磷酸化和总IkBa的降解，进而抑制P65的磷酸化和核转位，结合第二部分结果，HEV ORF3的这一抑制作用极有可能通过下调TLR4和CD14介导的。我们的结果提示HEV可能是通过其ORF3蛋白调控包括NF-kB在内的多条通路来抑制巨噬细胞的炎症反应、趋化作用、吞噬功能和模式识别受体的表达来维持其持续感染的，为HEV的慢性化感染提供了新的理论依据和治疗靶点。