新基因BTBD10对泌乳素瘤细胞增殖和凋亡的调控研究

泌乳素瘤发病与其细胞增殖和凋亡的调控异常有关。本课题组近期克隆到BTBD10基因，已证实在垂体有表达，泌乳素瘤较正常垂体表达明显升高，提示其可能会在泌乳素瘤的发病过程中发挥作用，但是目前尚未有BTBD10在垂体肿瘤中的研究。本课题组前期研究显示PP4可调控泌乳素瘤细胞的增殖和凋亡。近来研究提示BTBD10可结合PP2A调控Akt/PKB，而PP4正是PP2A 亚家族的重要成员之一。所以我们设想存在BTBD10-PP4-Akt/PKB信号通路调节泌乳素瘤的增殖和凋亡，即BTBD10可结合PP4，通过PP4介导Akt/PKB去磷酸化调节泌乳素瘤的增殖和凋亡。因此本课题旨在应用基因转染、siRNA干扰及基因敲除等技术研究BTBD10-PP4-Akt/PKB通路对泌乳素瘤细胞增殖和凋亡调控机制，为阐明泌乳素瘤的发病机制及对其防治提供新思路。

研究背景：.本课题组研究显示垂体瘤细胞较正常垂体细胞BTBD10表达存在明显差异，推测其可能参与泌乳素瘤的发病。本课题组前期研究提示PP4可能也与垂体泌乳素瘤的发病相关。故此可能存在BTBD10-PP4-Akt/PKB信号通路调节泌乳素瘤的增殖和凋亡。.研究目的和方向：.运用Western blot、基因转染及siRNA干扰等技术在分子水平和细胞水平验证BTBD10-PP4-Akt/PKB通路，研究该通路对泌乳素瘤细胞增殖和凋亡调控。.主要内容：.1.免疫共沉淀技术证明BTBD10和PP4c(PP4的调节亚基)间有无相互作用；过表达或干扰BTBD10的表达后观察泌乳素瘤细胞株MMQ细胞PP4c的表达情况；.2.过表达或干扰BTBD10及PP4c的表达后观察泌乳素瘤细胞株MMQ细胞Akt及磷酸化Akt蛋白表达变化及多巴胺受体表达变化及NF-kB的变化情况；.3.在Hela细胞中研究PP4c如何调控细胞周期和细胞凋亡； 主要研究结果和关键数据：.1.BTBD10和PP4c IP研究显示BTBD10和PP4之间相互作用不明显；BTBD10过表达和抑制表达后显示PP4c变化也不明显。.2. BTBD10、PP4c和Akt.BTBD10抑制表达后p-Akt(磷酸化的AKT)表达显著下降, BTBD10过表达后p-Akt表达显著增加。MTT实验显示BTBD10过表达组相比空白对照和空转染组相比，细胞相对活性明显增强。PP4c抑制表达后p-Akt(磷酸化的AKT)表达改变不明显，PP4c过表达后p-Akt表达改变也不明显。.3. PP4c调控细胞周期过表达PP4c基因后显示Hela细胞增殖受到明显抑制，G2/M细胞大量增加，提示PP4c可以诱导细胞阻滞于G2/M期。.4. BTBD10及PP4c调控泌乳素瘤多巴胺受体表达.BTBD10或PP4c过表达后多巴胺受体D2表达显著下降，BTBD10或PP4c抑制表达后多巴胺受体D2表达明显增加。PP4c过表达和抑制表达调控多巴胺受体均受到NF-kB抑制剂PDTC的抑制。PP4c抑制表达后胞核p65蛋白表达显著增加，过表达后胞核p65蛋白表达显著减少。.主要科学意义：.BTBD10和PP4c对泌乳素瘤发病发挥调控作用，部分阐明泌乳素瘤的发病机制。BTBD10和PP4c可调控泌乳素瘤多巴胺受体表达