P311在肾小管上皮细胞转分化过程中的作用及中药干预的影响

Renal fibrosis is the common pathological change in almost all kidney diseases progress to end-stage renal failure. Renal tubular epithelial cells transdifferentiation to myofibroblasts is an important mechanism involved in renal fibrosis. P311 protein plays an important role in the phenotypic transformation of fibroblasts. This topic will research the effects and mechanism of P311 in renal tubular epithelial cell transdifferentiation by gene transfection, construct the P311 gene adenovirus vector(pAd P311), transfect renal tubular epithelial cells, and add transforming growth factor-β1 to induct, test the expression of myofibroblast cell marker protein α-SMA; Through pAd P311 transfected UUO rats, observe the effects of renal tubular epithelial cells differentiation and TGF-β1/Smads signal transduction pathway. Intervened by Shenqi detoxification granule （embody the therapy of supplementing qi and activating blood circulation, warming yang and detoxification）, explore the role and possible mechanism of P311 in renal tubular epithelial cell transdifferentiation, and the effects of P311 by Shenqi detoxification granule intervention, and provide new ideas for the treatment of renal fibrosis.

肾纤维化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同病理改变。肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化是参与肾纤维化的重要机制之一。P311蛋白在成纤维细胞表型转化中有重要作用。本课题拟用基因转染的方法研究P311在肾小管上皮细胞转分化中作用及机制，构建P311基因腺病毒载体(pAd P311)，转染肾小管上皮细胞，并加入转化生长因子-β1诱导，检测肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA的表达；pAd P311转染UUO大鼠，观察肾小管上皮细胞转分化及 TGF-β1/Smads 信号转导途径的影响。并运用益气活血、温阳解毒中药参芪解毒颗粒进行干预，探讨P311在肾小管上皮细胞转分化中的作用及可能的机制，以及参芪解毒颗粒干预对P311的作用，为治疗肾纤维化提供新的思路。

肾纤维化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同病理改变。肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化是参与肾纤维化的重要机制之一。α-平滑肌肌动蛋白(α­SMA)肾小管上皮细胞-间细胞转分化的重要标志。Smad2和Smad3是具有同源性的蛋白，在糖尿病肾病、UUO等因素引起的肾纤维化中呈高表达。Smad7为抑制型Smad蛋白，可以抑制TGF-β对Smad2和Smad3的激活，阻断TGF-β/Smads信号传导通路，从而抑制细胞外基质的聚集。P311基因的编码蛋白P311能够成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，这种转化后的细胞并不表现致纤维化能力，因其抑制了TGF-β1、TGF-β2的表达，因此P311蛋白在成纤维细胞表型转化中有重要作用。.本课题用基因转染的方法研究P311在肾小管上皮细胞转分化中作用，并予参芪解毒颗粒干预，观察中药对P311作用的影响。构建P311基因腺病毒载体(pAd-P311)，转染UUO大鼠后给予参芪解毒颗粒灌胃，以观察pAd-P311对肾小管上皮细胞转分化的影响，以及参芪解毒颗粒对pAd-P311作用的影响。60大鼠随机分组为正常组、正常组+ pAd-P311组、模型组、模型+pAd-P311组、模型+中药组、模型+pAd-P311+中药组。4周后检测血清SCr、BUN、ALB水平；将肾组织病理切片进行HE、Masson染色，观察病理改变及肾间质纤维化情况；采用免疫组化法、Western blot 法检测肾组织中的α-SMA、smad2/3、smad7蛋白表达。.研究发现：经pAd-P311转染及参芪解毒颗粒治疗的大鼠存活率、体重、肾功能和肾脏病理变化均优于单纯UUO模型大鼠；免疫组化及Western blot检测发现各治疗组较模型组肾组织中α-SMA、smad2/3表达明显减少，而smad7表达增加；且能降低血清中SCr、BUN水平，提高ALB水平。在各治疗组中以pAd-P311+中药组效果最优。.研究结果表明：pAd-P311基因转染可降低UUO大鼠SCr、BUN水平，升高ALB水平，并下调α-SMA、smad2/3在肾组织中表达，上调smad7蛋白表达，影响肾小管上皮-间质转分化，从而改善肾纤维化。参芪解毒颗粒能够促进P311的抗纤维化作用。