基于黔产蕨类植物石韦利尿通淋物质组份筛选的品质评价研究

Pyrrosiae is one of Polypodiaceae family. Three most common species of Pyrrosiae in Guizhou are Pyrrosia petiolosa (Christ) Chin, P. lingua (Thunb.) Farwell and P．sheareri (Bak.) Ching. It is often used for promoting dieresis, relieving stranguria, alleviating fever and eliminating dampness. Some combination drugs containing this plant had been produced for promoting diuresis and relieving, but the active constituents are still unclear. Pyrrosiae is one of the most important ethnomedicine in Guizhou and this region is rich in its resource, so this plant should have a broad application prospect. Because of the special geographic location and various climate of Guizhou, the chemical constituents of Pyrrosiae in Guizhou are often changeable vastly. For thorough quality evaluation of this medicine, it is necessary to figure out the most important chemical constituents and active constituents for promoting diuresis and relieving of Pyrrosiae in Guizhou. Pyrrosiae in Guizhou is chosen as the research object of this project. Its active constituent for promoting diuresis and relieving stranguria will be screened out by pharmacodynamic experiments. Then, these constituent will be separated and identified by chromatographic technology and spectral method. These research results will be used for establishing the quality standards of three most common species of Pyrrosiae in Guizhou. This project will provide the scientific basis for the quality assessment of Pyrrosiae in Guizhou and the treatment using Pyrrosiae in Guizhou.

石韦为水龙骨科植物Polypodiaceae，常见的黔产石韦有三种即有柄石韦、石韦、庐山石韦，石韦具有清热燥湿，利尿通淋的功效，市场已有以此功效的多种石韦制剂（复方石韦片等），且其利尿、通淋物质基础未见报道。作为贵州主要的民族药之一，且贵州资源极其丰富，应用前景广阔，贵州地理位置特殊，气候等因素的差异，其化学成分往往差异较大，生长环境的不同，其所含化学成分变异亦比较大，有必要对利尿通淋功效基础、化学成分及其种类质量评价进行深入系统的研究。本项目以黔产石韦为材料，通过药效学实验筛选黔产石韦利尿、通淋的有效部位，以传统与现代分离纯化技术分离其化学成分, 采用现代色谱技术和波谱手段对活性部位化学成分进行分离与鉴定；以黔产石韦利尿、通淋的物质基础，建立三种石韦的质量标准。研究结果将为进一步客观评价石韦药材质量和保证临床疗效提供科学依据，有利于规范石韦流通品种，为研制利尿通淋药物打下基础。

尿石症是一种对人民生活质量有重大影响的泌尿系统多发病，而黔产有柄石韦具有利尿通淋之功效，是贵州少数民族的常用有效药物且已获开发，但其利尿通淋物质基础未见报道。项目组从黔产有柄石韦不同极性部位的急毒实验，建立大鼠水负荷模型及通淋（肾结石）动物模型，筛选出其利尿通淋作用的有效部位。采用LC/MS、代谢组学等研究，判断该药物利尿通淋的代谢通路及药效物质基础类型化合物。对该药物95%乙醇提取物采用凝胶、半制备HPLC等手段进行分离纯化。采用计算机辅助药物设计、创新利尿体外活性和建立通淋体外活性筛选模型、体内活性验证试验研究，确定了石韦利尿通淋的功效物质，首次完成了以功效物质进行质量评价研究，并建立石韦利尿通淋功效组分的HPLC-MS-MS检测模式。研究成果：黔产有柄石韦利尿通淋活性部位为石油醚和氯仿部位；代谢组学研究表明该药物利尿通淋的有效代谢途径为：氨基酸途径（利尿、通淋）、能量代谢途径（通淋）、酮代谢（通淋）等。该药物具有利尿通淋活性的成分为：小分子有机酸类、萜类等。从该药物95％乙醇提取物中分离得到60个单体化合物，鉴定了其中56个化合物（两个新化合物）。石油醚部位19个，二氯甲烷部位11个，乙酸乙酯13个，正丁醇部位13个；该药物利尿通淋代谢途径为多通路复杂代谢过程，是一个多物质作用功效所产生的结果，也是多成分协同作用的结果；利尿成分物质基础为小分子有机酸、坝巴酸、绿原酸甲酯、山奈酚、化合物（petiolide A新化合物）、蔗糖及(23E)-cycloart-23-ene-3β,25-diol等；通淋成分物质基础为坝巴酸、绿原酸甲酯、(23E)-cycloart-23-ene-3β,25-diol等；其中坝巴酸、绿原酸甲酯经过体内活性验证试验，有显著的利尿通淋活性。本项目在理论和技术层面进行了多项创新，项目的完成有利于黔产有柄石韦的临床应用及利尿通淋高效药物的产业化开发。