miR-33在鹅肥肝形成过程中的表达调控与作用机制研究

miR-33 is encoded by the intron of sterol regulatory element binding proteins (SREBPs) gene, which plays a pivotal role in the regulation of lipid metabolism related genes and can regulate cholesterol and fatty acids coordinating with SREBPs. As the main organ for lipid metabolism to poultry, many studies focused on the hepatic lipid metabolism. Goose is the classic species for fatty liver production because of the fortissimo ability of fatty deposits, meanwhile it supplies a good model for mammal fatty liver disease without any obvious pathological symptoms. In this project, the target genes of miR-33 will be verified by experiments in vitro. The mRNA level of miR-33 and its target genes will be detected. Up-regulated and down-regulated technologies for miRNA-33 and CROT so as to illuminate the expression regulation and action mechanism of miR-33 in the formation of fatty liver and in the hope to get a new target for the goose fat liver production and provide reference for human fatty liver disease.

miR-33是由固醇调节元件结合蛋白（SREBPs）基因内含子编码，和SREBPs协同调节机体内胆固醇和脂肪酸水平，在平衡脂类代谢相关基因的表达方面起到重要作用。肝脏是家禽脂类代谢的主要器官，肝中脂类代谢研究已成为热点。鹅以其极强的脂肪沉积能力成为肥肝生产的主力军，同时鹅在肥肝形成过程中不会出现明显的病理症状，为脂肪肝研究提供了良好的模型。本项目以miR-33为研究对象，拟通过体外实验验证其靶基因并检测miR-33和靶基因mRNA及其编码蛋白在不同填饲时期鹅肝脏中的表达情况；对miR-33和靶基因CROT进行上调和下调表达研究，阐明miR-33在鹅肝脂类代谢过程中的生物学功能和作用机制，获得提高鹅肥肝生产与诊断的新型靶标，并为人类脂肪肝的研究提供参考依据。

本研究以鹅肥肝形成过程中关键mirRNA为切入点，研究了miR-33 及靶基因肉碱O辛基转移酶基因的靶向关系，并检测了miR-33和靶基因mRNA及其编码蛋白在不同填饲时期鹅肝脏中的表达规律；以鹅原代肝细胞为实验素材，通过过表达和抑制正反向、脂肪肝相关因子诱导等途径研究miR-33 在鹅肥肝形成过程中的作用机制。实验获得miRNA-33靶基因CROT序列并进行了生物信息学分析，检测出CROT基因在填饲各阶段肝脏中的mRNA水平均显著下调，且在19天填饲组中的蛋白表达水平也显著下调，这与miRNA-33的表达趋势正好相反。使用脂肪肝形成相关因子（葡萄糖和胰岛素）处理鹅原代肝细胞发现，葡萄糖处理可以显著抑制miRNA-33表达并诱导CROT基因，而胰岛素则显著诱导miRNA-33表达并抑制CROT基因表达，填饲引起的鹅肝脏中发生的胰岛素抵抗（肝脏中胰岛素水平升高）是导致miRNA-33表达上调的主要原因，继而调控CROT基因表达，研究结果表明miRNA-33与CROT基因存在潜在的调控关系，参与鹅肥肝的形成。