色素上皮衍生因子慢病毒载体抑制脉络膜新生血管的实验研究

脉络膜新生血管（CNV）是年龄相关性黄斑变性（AMD）等严重致盲性眼病的重要特征病变。药物治疗是目前临床研究的主要方向。色素上皮衍生因子（PEDF）与CNV的发生有密切关系。探讨PEDF对CNV的抑制作用，对于探寻新的AMD治疗药物、提高AMD治疗效果具有重要意义。本课题将采用经典的激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型，并构建携带增强型绿色荧光蛋白的PEDF慢病毒表达载体，通过玻璃体内注射和球周注射两种途径，采用影像学、组织学、分子生物学等技术方法，重点探讨PEDF在眼内的药代动力学变化、不同给药途径下PEDF在眼内组织中的分布特点、PEDF对脉络膜新生血管的抑制效果及作用机制，以期为眼底新生血管的治疗提供新思路和新方法。

脉络膜新生血管（CNV）是年龄相关性黄斑变性（AMD）等严重致盲性眼病的重要特征病变。药物治疗是目前临床研究的主要方向。色素上皮衍生因子（PEDF）与CNV的发生有密切关系。探讨PEDF对CNV的抑制作用，对于探寻新的AMD治疗药物、提高AMD治疗效果具有重要意义。本课题采用经典的激光诱导大鼠脉络膜新生血管模型，并构建携带增强型绿色荧光蛋白的PEDF慢病毒表达载体，通过玻璃体内注射和球周注射两种途径，采用影像学、组织学、分子生物学等技术方法，重点探讨PEDF对脉络膜新生血管的抑制效果及作用机制。结果显示，我们成功构建过表达鼠源性PEDF-EGFP慢病毒表达载体并检测其滴度，1×108 Tu/ml；在氩离子激光诱导CNV模型后第7天起，玻璃体腔注射过表达PEDF基因的鼠源性PEDF-EGFP慢病毒载体组，活体FFA及OCT检查，就开始显示CNV荧光素渗漏程度减轻，CNV的最大厚度降低；通过病理学检查及脉络膜血管铺片，也验证了CNV的最大厚度及面积降低；通过RT-PCR及Western-blot方法分别在mRNA及蛋白水平证实PEDF明显增高，VEGF表达降低，同时Flk-1也明显降低，三者之间具有相关性；而作为阴性对照的NC-GFP-LV玻璃体腔注射组，影像学、组织学及分子生物学等技术方法结果显示，未见PEDF的表达增加、VEGF及Flk-1的表达降低，CNV渗漏未见明显减轻、最大厚度及面积未见明显减少，与玻璃体腔注射过表达PEDF组具有明显差异。对于球周注射同样剂量的过表达PEDF慢病毒表达载体，无论是活体FFA及OCT方法检查CNV渗漏，还是离体病理学切片及脉络膜血管铺片方法检测CNV大小，以及分子生物学水平检测PEDF的表达量等方面，均未见到与阴性对照组之间的差异。本实验结果提示，PEDF具有明显的抑制CNV的作用，推测可能通过抑制Flk-1降低VEGF的表达，来达到抑制CNV的作用。可否单独使用PEDF来抑制脉络膜新生血管或联合抗VEGF的方法来抑制脉络膜新生血管，本课题为其提供了新思路和新方法。