色素上皮衍生因子多肽的制备及对氧诱导小鼠视网膜新生血管的抑制作用

早产儿视网膜病(ROP)是导致儿童失明的重要原因，目前仍缺乏有效治疗手段。新生血管形成是其主要发病机制，色素上皮衍生因子（PEDF）可强效抑制ROP新生血管形成，但分子量过大，临床应用困难。本项目拟制备小分子PEDF多肽，观察它对ROP新生血管的抑制作用及其作用机制，旨在探索有效的防治手段，以减少ROP发病率和减轻ROP严重程度。我们拟应用蛋白重组技术制备PEDF小分子多肽，经蛋白测定和氨基酸测序等方法鉴定该多肽的成分，体外实验和在体实验确定其抗血管活性；并给7日龄新生小鼠吸高浓度氧气，制备ROP动物模型；通过玻璃体注射和直接滴眼的方法给药，观察PEDF小分子多肽 对ROP新生血管形成的抑制作用，摸索最简洁有效的给药方式，为防治ROP开拓新方法提供实验基础。

早产儿视网膜病（retinopathy of prematurity，ROP）是世界范围内儿童致盲的重要原因，已成为急待解决的重要问题，探求药物治疗成为当前ROP的研究热点。PEDF是目前已知的最强有力的血管生长抑制因子，天然存在于眼内（如玻璃体和房水），维持这些组织在生理状态下的无血管特性。我们前期实验已成功制备出PEDF蛋白的全序列，并证实玻璃体内注射PEDF能有效抑制视网膜新生血管，且不影响正常血管发育。但玻璃体内注射给药的方法在临床实践中很难推广，因此本项目再次应用基因工程和蛋白重组技术制备重组PEDF（rPEDF）多肽，应用Western Blot证实多肽抗原性，通过测序确定其氨基酸序列，通过细胞培养和动物实验检测其在体外和体内的抗血管活性；通过比较玻璃体内注射和直接滴眼两种给药方式，证实rPEDF多肽对ROP新生血管存在抑制作用，而且采用直接滴眼的无创方式也存在部分抑制血管增生的作用。这是本实验最令人欢欣鼓舞的结果！