视网膜色素上皮细胞调节局部补体激活与脉络膜新生血管形成机制研究

确定CFH 和FB等补体基因多态性与罹患老年性黄斑变形(AMD)的关系是近来有关AMD发生机制研究的最新进展。补体系统的调节失控及激活与AMD中脉络膜新生血管（CNV）的发生发展关系为一个全新的研究领域。视网膜色素上皮细胞(RPE)损伤可能是局部补体异常激活的始发因素，而异常激活的补体则可能是导致CNV形成的主要原因之一。本项目采用体外RPE与脉络膜血管内皮细胞(CEC)的三维共培养系统及体内CNV大鼠模型，比较正常和损伤RPE对补体激活的影响并检测其补体调节蛋白表达变化；观察激活补体对CEC增生和CNV 形成的影响；运用RNA干扰技术特异性阻断CFH, FB及CD46以探索它们在CNV形成中的作用；运用CFH,CD46的重组蛋白及抗-FB抗体，检测它们对CNV的抑制作用。在细胞分子水平探讨补体在CNV发生发展中的作用，寻求新的可干预的靶向分子，为AMD及CNV的防治开辟全新的途径。

确定CFH 和FB等补体基因多态性与罹患老年性黄斑变性(AMD)的关系是近来有关AMD发生机制研究的最新进展。补体系统的调节失控及激活与AMD中脉络膜新生血管（CNV）的发生发展关系为一个全新的研究领域。基于文献报道及前期研究，我们推测：视网膜色素上皮细胞(RPE)损伤可能是局部补体异常激活的始发因素，而异常激活的补体则可能是导致CNV形成的主要原因之一。本项目采用体外RPE与脉络膜血管内皮细胞(CEC)的三维共培养系统及体内CNV大鼠模型，比较正常和损伤RPE对补体激活的影响并检测其补体调节蛋白表达变化；观察激活补体对CEC增生/迁移和CNV 形成的影响；运用RNA干扰技术特异性阻断CFH以探索其在CNV形成中的作用。结果显示：1).RPE 的损伤可导致补体激活的负调控蛋白CFH表达下降，从而引起补体系统激活。2）RPE损伤及补体系统激活可以刺激CEC迁移及体外血管样结构形成。3) 在成功建立激光诱导的活体CNV模型的基础上，证明荧光血管造影为可行的检测方法，可应用于活体上定性定量地评估CNV 的发生发展。4）在活体CNV 模型中，进一步验证RPE损伤,补体调节蛋白CFH表达下降，补体系统的异常激活可能是导致CNV发生的重要原因之一。 5）RNA干扰可在体内和体外模型中特异性阻断 CFH表达， 激活补体系统，导致CNV和血管样结构形成发生。 6）RPE-脉络膜复合体表达除CFH之外的其它多种膜结合型补体调节蛋白包括CD46,CD55和CD59，同时也表达补体系统主要成分C3和C5,进一步提示RPE-脉络膜复合体存在自身局部补体-补体调节蛋白系统。 本研究结果为证实我们的假设提供了进一步的实验依据，为在细胞分子水平探讨补体在CNV发生发展中的作用奠定了新的实践基础。 同时也启发我们开辟新的研究领域，即在有完善的局部补体系统存在的条件下，单一干预某一个靶向分子，并不能有效地阻断补体系统激活和CNV的发生发展。 寻求新的靶向细胞/组织及探索“单一干预，多个靶向”手段，将为今后真正有效防止AMD及CNV的发生发展开辟全新的途径。