外壳蛋白penton和Fiber在腺病毒31型嗜肠道感染中的作用及机制研究

Children are infected by adenovirus mainly in upper/lower respiratory tract, gastrointestinal tract and conjunctiva, recently it was found to lead to fatal disease in immunocompromised transplant infant. It is susceptible to adenovirus in gastrointestinal tract, and our previous study showed that adenovirus serotype 31 was only less than adenovirus serotype 41 in diarrheal children. However, its mechanism of Intestinal susceptibility is still unclear. Other studies on different adenovirus infection show that: the coat protein penton and fiber play a key role in process of virus adhesion and internalization to susceptible cells. In this study, adenovirus serotype 31 isolate is cloned for its penton and fiber gene, which can be assembled to a dodecahedron. They are analyzed bases on their characteristics of gene、protein and cell, and verified their tolerance to the gastrointestinal tract, their binding to the receptors on intestinal cell. All of these may in part clarify the role and mechanism of penton and fiber in intestinal infection caused by adenovirus serotype 31. It is important for revealing the pathogenesis of adenovirus, especially pathogenicity in the gastrointestinal tract. Based on the formation of Ad31 dodecahedron, it should provide a new clue for adenoviral vector and targeted therapy...

腺病毒主要引起儿童上/下呼吸道，胃肠道和结膜的感染，近年来多有报道免疫受损的移植患儿感染腺病毒会引起致命性疾病。胃肠道是腺病毒最易感的部位之一，我们前期的研究表明腺病毒31型为仅次于腺病毒41型的嗜肠道感染型别，但其嗜肠道感染的机制尚未明确。其他致病型腺病毒感染研究表明：外壳蛋白penton和fiber在病毒入侵机体过程中起到粘附、内化易感细胞的关键作用。本课题应用昆虫杆状病毒体系，表达腺病毒31型流行株的上述两种蛋白以及由它们组成的十二面体病毒样颗粒。通过基因分析并在蛋白、细胞水平研究验证它们对胃肠道环境的耐受力、与肠道细胞受体的结合作用，以期阐明这两种外壳蛋白在31型腺病毒感染肠道细胞过程中所起到的作用及机制，并探索新的嗜肠道作用因子。对揭示腺病毒致病机理尤其是对胃肠道的致病性具有重要意义。而十二面体颗粒的构建也为腺病毒载体，靶向治疗的应用提供新方向。

腺病毒主要引起儿童上/下呼吸道，胃肠道和结膜的感染，近年来多有报道免疫受损的移植患儿感染腺病毒会引起致命性疾病。胃肠道是腺病毒最易感的部位之一，我们前期的研究表明腺病毒31型为仅次于腺病毒41型的嗜肠道感染型别，但其嗜肠道感染的机制尚未明确。其他致病型腺病毒感染研究表明：外壳蛋白penton和fiber在病毒入侵机体过程中起到粘附、内化易感细胞的关键作用。本课题用肠道细胞系Caco-2分离出腺病毒31型的流行株，并应用昆虫杆状病毒体系成功表达纯化了上述两种蛋白，确证它们自然状态下可分别以五聚体和三聚体形式存在，但两者共表达无法组装成十二面体病毒样颗粒。腺病毒31型比其他型别（3型或41型）更耐受肠道低pH值和蛋白酶环境，在健康儿童的粪便标本中也未检测到该病毒，连同之前在呼吸道标本中也无该病毒的检出，进一步证明了其是肠道的一个致病原。未检测到腺病毒31型的这两种蛋白可以同与理论推测的受体（CAR受体和整合素αV）结合，但通过液相质谱发现了其他能同它们结合的蛋白，如其中Q1047是两个蛋白都结合的蛋白，可催化O-连接寡糖生物合成的起始反应。而与peton结合的Q86X29参与蛋白定位在细胞紧密连接，P05556属于整合素β1家族。这些为下一步验证受体蛋白提供了选择。并为后期的抗原表位的鉴定、快速诊断试剂的研发，腺病毒晶体结构功能的研究和肠道靶向载体的研究提供了基础。对揭示腺病毒致病机理尤其是对胃肠道的致病性具有重要意义。