博卡病毒MVC感染的细胞嗜性及转铁蛋白受体在感染中的功能研究

The the bocavirus MVC is one of the parvovirus family members, and there is no reports about the molecular mechanism of the Bocavirus infection of target cells and cell tropism. We successful obtained the bocavirus MVC infectious clone vector(named pIMVC)in the preliminary study, and analyzed the characteristics of virus genome sequence and related genetic features. This study aims to,using the infectious clone vector of bocavirus MVC, further reveal bocavirus MVC infectious ability,DNA replication of viral genome, virus-related gene expression and virus particle formation in cell lines dirived from different species;Throughthe establishment of cell lines (CHO-cTfR) with stable expression of canine transferrin (TfR), to research MVC infection of CHO-cTfR cells; With established a sTfR WRD cells (MVC addicted to cell) stably expressing secretary TfR, to study the sTfR on MVC infection in antagonism;Constructed mutant of TfR with different functional areas, to study the role and functions of TfR in the MVC infection;And to study the interection between TfR and VP2 protein of MVC using mune coprecipitation. The completion of this research will reveal the cell tropism of Bocavirus infection of and the role of TfR in virus infection, but also will provide an opportunity and theoretical study for future research of the infection mechanism and molecular characteristics of human bocavirus, HBoV.

博卡病毒MVC属细小病毒家族成员之一，博卡病毒感染靶细胞的分子机制及细胞嗜性国内外尚无研究报道。申请者在前期研究中成功获得了博卡病毒MVC感染性克隆载体pIMVC，分析了病毒基因组DNA序列特点及相关基因的特性及功能。本研究旨在揭示博卡病毒MVC在不同种属来源细胞系的感染能力、病毒基因组DNA复制、病毒相关基因表达以及病毒颗粒的形成能力；通过建立稳定表达犬转铁蛋白（TfR）细胞系（CHO-cTfR），研究MVC感染CHO-cTfR细胞的能力；建立稳定表达分泌性sTfR的WRD细胞（MVC的嗜性细胞）系，研究sTfR对MVC感染的拮抗作用；构建TfR不同功能区突变体研究TfR在MVC感染中的作用；通过免疫共沉淀技术研究TfR与病毒衣壳蛋白VP2的相互作用。此项研究的完成将揭示博卡病毒感染的细胞嗜性、揭示TfR在病毒感染中的作用，为人博卡病毒HBoV的基因分子特性以及感染机制的研究提供契机。

利用感染性克隆pI-MVC,完成了博卡病毒MVC在不同种属来源细胞系中的病毒基因组DNA复制、病毒相关基因表达以及病毒颗粒形成能力的研究, 证实博卡病毒MVC能够在COS7、EBTR、CrFK三种非嗜性细胞中进行DNA的复制、转录和形成病毒颗粒。完成MVC在不同种属来源细胞系感染能力的研究，证实MVC不能感染包括COS7、EBTR、CrFK在内种属来源细胞系；建立了稳定表达犬转铁蛋白（TfR）细胞系（CHO-cTfR）、建立了表达分泌性sTfR的WRD细胞系。通过免疫共沉淀、GST pull-down 证实博卡病毒VP2蛋白和TfR存在相互作用，同时分泌的sTf蛋白可以在一定程度抑制MVC对WRD靶细胞的感染，初步证实TfR蛋白在MVC感染WRD细胞过程中起到一定的作用，但不是MVC感染靶细胞的唯一受体。针对研究结果对研究内容进行了相应的拓展，增加了：与博卡病毒MVC壳蛋白VP2相互作用的宿主细胞蛋白的筛选和分析鉴定；通过质谱鉴定，初步筛选得到一些与VP2结合的宿主细胞蛋白成分如HSP70，endoplasmin precursor, autophagy-related protein,并对候选成分HSP70进行了初步的分析和鉴定。.在本基金的资助下，目前发表学术论文4篇，其中SCI收录1篇，2篇为国内核心（细胞与分子免疫学，Medline收录），1篇（四川大学学报，印刷中）；正在撰写论文1篇（SCI 论文1篇）。2014年参加国内生物化学与分子生物学学术会议1次，2016年参加首届西北生物化学与分子生物学学术研讨会1次。研究生参加学术会议3人次。