miR-155调控Th1/Th2平衡及IgA糖基化在IgA肾病发病机制中的作用研究

Dys-glycosylation of IgA caused by low expression of glycosylation enzymes in B lymphocytes under inflammatory circumstance is one of the key pathogenesis of IgA nephropathy. miR-155 can regulate the T lymphocyte differentiation and function of B lymphocyte glycosylation enzymes. Our research indicated that the miR-155 expression level in peripheral lymphocytes of IgAN patients is significantly lower than normal controls. It is speculated that the lower expression of miR-155 in IgAN patients affects the T lymphocyte differentiation, increases the Th2 cells, decreases the Treg cells, produces many cytokines, enhances the IgA secretion of B lymphocytes, inhibits glycosylation enzymes, causes severe aberrant IgA glycosylation, forms polymeric IgA which deposits in kidney tissues, and finally leads to IgAN. Therefore, up-regulation of miR-155 may be a potential treatment of IgAN. In this project, we will clarify the effect of miR-155 on regulation of peripheral and tonsil lymphocytes in T cell differentiation, B cell glycosylation enzyme expression as well as IgA glycosylation level. The potential of up-regulation miR-155 as a novel treatment for IgAN will also be tested in vitro and in vivo. Through this study, a better understanding of IgAN pathogenesis will be gained and feasibility of novel gene therapy for IgAN will be verified.

炎症状态下B淋巴细胞糖基化酶表达低下引起的IgA糖基化缺陷是IgAN的关键发病机制。miR-155能调节T淋巴细胞分化及B淋巴细胞糖基化酶的功能。研究发现IgAN患者外周淋巴细胞miR-155表达显著低于正常对照。我们推断IgAN患者中miR-155的低表达能影响T细胞分化，使Th2细胞增加，Treg细胞减少，产生大量细胞因子，促使B淋巴细胞分泌大量IgA，抑制糖基化酶表达和功能，导致IgA分子异常糖基化加重，形成多聚IgA，沉积于肾脏组织引起IgAN。因此升高miR-155表达可能是治疗IgAN的潜在方法。本项目将明确miR-155对IgAN患者外周血和扁桃体T淋巴细胞分化、B淋巴细胞糖基化酶表达、IgA分子糖基化水平的调控作用，并通过体内和体外干预实验探讨上调miR-155表达作为IgAN新治疗靶点的疗效。一方面加深对IgAN发病机制的认识，另一方面初步探索基因治疗IgAN的可行性。

【目的】miR-155 是调节T 淋巴细胞分化及B 淋巴细胞糖基化酶的重要microRNA。前期研究发现炎症状态下B 淋巴细胞糖基化酶表达低下引起的IgA 糖基化缺陷是IgAN 的关键发病机制。为了解miR-155介导的T细胞分化及IgA分子糖基化异常机制我们开展了该研究。【内容】我们通过检测IgA肾病患者外周血淋巴细胞miR表达，T淋巴细胞亚群及调控因子，T淋巴细胞重要细胞因子表达了解IgA肾病患者体内miR-155与疾病的相关性。在体外研究中采用miR-155抑制剂和拟似物和LPS一同刺激IgA肾病患者外周血淋巴细胞，检测T细胞亚群及IgA分子糖基化情况。在动物模型中我们采用miR-155体内转染上调IgA肾病模型小鼠脾脏miR-155表达水平，检测肾脏组织病理改变。另外，我们还在体外研究中探索了中药黄芪有效成分对外周血淋巴细胞miR-155的调控作用及改善IgA分子糖基化程度的效果。【结果】通过microRNA microarray基因芯片分析发现IgAN患者外周血淋巴细胞部分microRNA存在表达差异，其中mir-155表达显著低于正常对照。IgA肾病患者外周血淋巴细胞分化关键酶，Th1/Th2亚群，重要细胞因子均受miR-155调节，和正常对照相比存在显著差异。miR-155的表达水平与Foxp3、Cosmc及糖基化及临床指标具有相关性。进一步研究发现在IgA肾病患者的肾脏组织中重要细胞因子（IL-4和IL-17）表达显著高于正常对照。采用LPS+miR-155 ihibitor/mimic刺激IgA肾病患者外周淋巴细胞后分别检测T细胞亚群，Cosmc基因表达，IgA1分子糖基化水平，我们发现miR-155 ihibitor可进一步加重Th细胞亚群飘逸和IgA1分子的糖基化异常，而miR-155 mimic则能对抗相关变化。同时T细胞分化关键酶和细胞因子也有相关变化。miR-155体内转染治疗后小鼠脾组织miR-155水平显著升高，淋巴细胞的分化情况出现显著变化。采用miR-155体内转染治疗IgAN模型小鼠后IgA肾病小鼠肾脏组织IgA沉积显著减少，病理改变减轻。【结论】通过该项目的开展，我们发现miR-155表达差异可能是IgA肾病的重要发病机制之一。miR-155可能可作为今后IgA肾病治疗的潜在靶点。传统