核磁共振研究蛋白质内含子的溶液性质与蛋白剪接机理

本项目以二维、三维核磁共振(NMR)为主要手段，研究'蛋白质内含子'（Intein）的溶液性质与蛋白剪接机理。研究包括：蛋白质保守残基的突变体制备、通过NMR谱图分析蛋白质和特定氨基酸残基的溶液性质，以pH滴定检测蛋白质活性中心的组氨酸和天冬氨酸侧链的质子化程度以及氢键状态、通过R1、R2、NOE、CPMG等实验计算蛋白质的动力学参数、结构计算。并以NMR结合ITC、SPR等手段研究金属离子与Intein的反应过程，探讨配位方式和配位反应的热力学参数与金属离子对Intein抑制作用的关系。.本课题的研究将运用多种NMR技术，获得Intein蛋白质肽链以及关键残基侧链的溶液性质，通过定点突变获得单个保守残基突变对蛋白质性质的整体影响，系统地研究蛋白质的溶液性质以及关键残基在Intein剪接过程中的作用，阐明蛋白质的剪接机理和金属离子的抑制机理。