鸭跖草活性成分抗流感病毒作用及免疫调节机制的研究

前期研究表明，鸭跖草总生物碱具有良好的体内外抗甲型流感病毒作用。在此基础上，本课题拟从鸭跖草总生物碱中分离新的生物碱类化合物并作结构鉴定，结合文献报道的9种生物碱类化合物，通过体外抗流感病毒试验筛选出活性较强的成分。进而以流感病毒的生物学靶点（血凝素、神经氨酸酶、聚合酶复合体PA亚基、基质M蛋白等）为切入点，观察鸭跖草活性成分对流感病毒增殖各环节的影响；以T、B淋巴细胞和相关细胞因子为切入点，观察鸭跖草活性成分对流感病毒感染小鼠免疫功能的动态影响；以甲型流感病毒致病过程中的非结构蛋白1、Toll样受体3和干扰素诱导跨膜蛋白3等为切入点，观察鸭跖草活性成分对流感病毒感染小鼠的动态免疫调控机制。探讨其作用靶点和作用机制，为研制新的高效低毒的抗流感病毒药物提供理论依据。

鸭跖草植物资源分布广泛、价廉易得，前期研究表明其具备临床应用前景。本项目采用阳离子交换树脂柱纯化法结合制备高效液相色谱法从鸭跖草中提取分离得到生物碱类成分：Harman、1-carbomethoxy-β-carboline (CMCL)、1-deoxymannojirimycin (DMJ)、2,5-dihydroxymethyl-3,4-dihydroxypyrrolidine (DMDP)、α-homonojirimycin (HNJ)，开展如下研究：1）经体外抗甲型H1N1流感病毒作用研究，筛选出安全性较好且活性较强的成分：CMCL:DMJ (重量比1:2) 配比化合物、HNJ；通过不同给药方式及不同时间段给药，观察了鸭跖草活性成分对流感病毒增殖环节的影响，结果表明，鸭跖草活性成分预处理和后处理对流感病毒增殖具有较强的抑制作用，感染后3 h药物抗流感病毒作用较强。2）经体内抗流感病毒作用研究，观察了鸭跖草活性成分对流感病毒致小鼠死亡的保护作用及小鼠流感病毒性肺炎的影响，结果表明，鸭跖草活性成分可降低流感病毒感染小鼠的死亡率，延长其存活时间；可抑制流感病毒感染小鼠引起的肺炎，明显降低肺指数，改善肺部病理组织学变化，在感染后2、4、6天可不同程度降低肺组织中流感病毒RNA含量。3）以流感病毒致病过程中相关炎性细胞因子为切入点，观察鸭跖草活性成分对流感病毒感染小鼠的动态免疫调控机制，结果表明，鸭跖草活性成分于感染后2、4、6天可不同程度提高抗炎细胞因子（IFN-γ、IL-10）的水平，而降低促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）的水平，进而抑制免疫炎性反应和病毒感染性肺炎。4）体内外抗流感病毒作用及免疫调控机制研究均提示，鸭跖草活性成分与阳性药达菲或病毒唑抑制病毒复制的作用环节和作用靶点不同。. 综上，本项目预期目标基本完成，可望为植物资源的进一步开发奠定基础，为研制新的高效低毒的抗流感病毒药物提供科学依据。