新型重组毒素uPAa-melittin对卵巢癌靶向治疗的实验研究

卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病，本项目就是以uPA/ uPAR 系统做为抗卵巢癌药物作用的一个新靶点,利用uPA的结构特点，以A链与卵巢癌细胞表面的受体结合,以小分子毒素melittin替代B链为靶向药物，靶向定位杀伤卵巢癌细胞，实现了特异性靶点、高效结合、靶向杀伤，而对正常组织无毒或低毒性的治疗目的。本项目利用基因工程技术、发酵技术以及蛋白纯化技术，获得高产量、高纯度、高活性的uPAa-melittin新型重组毒素。通过其对卵巢癌细胞株及卵巢癌动物模型的一系列研究来观察uPAa-melittin对卵巢癌的治疗作用并探讨其作用机制。本项目的意义就在于以uPA/ uPAR 系统为一个新的平台，探索一个新的治疗卵巢癌药物的靶点，构建具有"一靶双效"的新型重组毒素。为卵巢癌的治疗开辟一个全新的设计思路与途径。

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，70％以上的卵巢癌患者就诊时病变已属于晚期。针对卵巢癌的靶向治疗，能够高效并靶向性地杀伤卵巢癌细胞，是一种治疗卵巢癌有效的新途径。项目组研究发现在卵巢癌患者的原发病灶以及转移病灶内尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）与尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）呈高表达，而在正常组织中无表达或仅有微弱表达。因此我们将uPA/uPAR系统作为卵巢癌治疗的新靶点。同时选择小分子毒素—蜂毒肽（melittin）做为与特异性靶点结合的靶向药物。项目组利用基因工程技术、大规模发酵技术以及蛋白纯化技术，获得高产量、高纯度、高活性的新型重组毒素uPAa-melittin，经过80升发酵罐的大规模发酵、纯化后目的蛋白产量为330mg/L，利用卵巢癌细胞株及动物模型、CCK-8、流式细胞仪、免疫组织化学染色、RT-PCR、Western blot等实验方法和技术，进行了靶向杀伤作用的研究，实现了特异性靶点、高效结合、定向杀伤卵巢癌细胞，而对正常组织无毒或低毒性的治疗目的，同时进一步研究了uPAa-melittin抗卵巢癌侵袭转移的作用，并对uPAa-melittin抗卵巢癌的作用机制进行了探讨研究，结果表明uPAa-melittin对卵巢癌细胞的转移性生长具有明显的抑制作用，其作用机制通可能是过诱导卵巢癌细胞SKOV3的凋亡实现的。而诱导凋亡的机制可能是与线粒体凋亡路径的调控有关。本项目以uPA/uPAR系统做为一个新的平台，探索一个新的治疗卵巢癌的药物作用靶点，构建具有新型重组毒素uPAa-melittin，并验证了其对卵巢癌的靶向治疗作用，这是本项目组的自主创新设计，为研究卵巢治疗的新型靶向药物提供了一个新途径。