早期肥胖对雌鼠生殖功能的长期程序化作用

研究表明生命早期的事件如围生期的环境能改变机体的神经内分泌的发育，影响成年后的生理调节系统如下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的功能。肥胖尤其是儿童期肥胖的增加，成为当今社会的一大问题。早期肥胖和冠心病、糖尿病及代谢综合症等密切相关。然而，目前还没有关于早期肥胖对生殖功能长远影响（程序化作用）的研究- - 下丘脑生殖调节中枢GnRH脉冲分泌和kiss1/kiss1r系统在中枢（下丘脑）和外周（卵巢）表达的改变。本研究将运用动物实验学、分子生物学、生物化学、蛋白质组学等技术来研究小窝喂养的大鼠（肥胖模型）对青春期发育、排卵周期和生殖能力的影响及GnRH分泌的改变和kiss1/kiss1r系统在下丘脑和卵巢的表达，阐明生命早期的肥胖能否通过影响HPG轴的发育而改变雌鼠的生殖调节功能，从而为临床预防和治疗肥胖导致的生殖功能失调提供新的科学依据和治疗靶点，为预防和治疗发育起源的疾病提供新的科学依据和基础。

研究背景.肥胖与女性卵巢功能的降低密切相关。然而，肥胖是通过何种机制影响卵巢功能的到目前为止尚不明确。..主要内容.（1）将断奶后（出生第21天）的雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分成高脂组（HFD组）、对照组（NCD组）。每周测体重，生后第28天开始监测青春期启动和排卵周期的变化。分别于生后第30、42、70天行双侧卵巢切除术，荧光定量PCR法测定Kiss1、Kiss1r，以及排卵相关基因GDF9、BMP15、FSHR、PTGS2 mRNA的表达水平；免疫组化法测定Kiss1、Kiss1r蛋白的免疫反应性。.（2）将雌性SD大鼠在出生当天随机分成2组：实验组(SL组)，小笼喂养；对照组(NL组)，正常喂养，每笼12只。每周测体重，生后第28天开始监测青春期启动时间和排卵周期的变化。生后第42、70日收集卵巢、肾上腺组织，测量最大卵泡的卵泡内膜厚度变化；用免疫组化方法测定卵巢、肾上腺交感神经兴奋性(酪氨酸羟化酶TH)的改变；用原位杂交方法测定中枢蓝斑核的TH mRNA的表达变化。..重要结果.（1）高脂饮食能显著增加雌鼠体重，使青春期提前，扰乱雌鼠正常卵巢周期及降低排卵相关基因GDF9、BMP15、FSHR、PTGS2 mRNA的表达。与NCD组相比，出生第42天HFD组的Kiss1 mRNA水平在动情前期、动情期显著下降。同样，HFD组第70天的Kiss1 mRNA表达在动情前期、动情期和动情后期也呈显著下降。在动情前期和动情期，HFD组窦状卵泡的卵泡膜细胞中，Kiss1蛋白的免疫反应性在第42天和第70天均较NCD组降低。同时，HFD组排卵前卵泡的卵泡膜细胞中，Kiss1蛋白的免疫反应性也较NCD显著降低。.（2）与NL组相比，SL组体重增加，青春期启动明显提早，正常排卵周期显著减少。出生第42天SL组卵巢的卵泡内膜厚度较NL组明显增加。同时，第42、70天SL组卵巢的TH免疫染色明显增强，第70天SL组肾上腺的TH免疫染色也较NL组增强，第42、70天SL组蓝斑核的TH mRNA表达明显增加。..科学意义.早期肥胖对雌性大鼠的排卵功能有着长期的影响，可能与卵巢Kiss1 mRNA和Kiss1蛋白的表达下调有关。同时，中枢和卵巢、肾上腺交感神经兴奋性(酪氨酸羟化酶TH的表达水平)增加也可能是肥胖导致卵巢排卵功能异常的一个机制。