板蓝根中两种化合物抑制EV71病毒感染培养细胞和实验小鼠的作用及机制

EV71病毒感染引起的手足口病传染力强、致死率高、危害大，且尚无预防和治疗的有效药物。我们在前期研究中分离得到病毒株EV71-Tj-100623，并初步证明从板蓝根中提取的两种化合物2-甲基-4(3H)-喹唑酮和大青素B对该病毒具有较好的抑制作用。本课题用Vero细胞、神经元细胞、心肌细胞和活体乳鼠为研究对象，通过显微和亚显微观察、细胞增殖抑制检测、病毒学检测及药物干预和生理病理分析，探讨这两种化合物对于EV71感染的抑制作用以及对于宿主细胞和细胞器损伤的保护作用；通过抑制剂和抗体竞争阻断、免疫电镜定位和免疫印记检测等方法，确定与EV71感染有关的细胞受体，并探讨这两种天然化合物抑制该病毒感染的机制。本课题要点有：①解决EV71病毒感染后乳鼠存活时间过短（4-6天）的问题，建立适当的动物感染模型；②确定与EV71感染有关的细胞受体，诠释EV71感染途径，为抗手足口病药物开发提供理论依据。

本项目（1）确认了抑制EV71病毒对体外培养的Vero细胞造成伤害的最适浓度为大青素15μg/ml+喹唑酮5μg/ml：最佳作用方式为同时加药，起效时间为加药后24小时等技术参数；（2）证实了EV71病毒能够诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡，并初步阐明了其作用是通过上调细胞内源性的microRNA let-7b实现的，其机制是将细胞分裂阻断于G0/G1期；而凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-7和Caspase-3均参与了此过程，所以EV71诱导的细胞凋亡可能与线粒体的稳定性有关；（3）测试了红景天苷等7种化合物对于Vero细胞的毒性和抑制EV71病毒的作用。其中，槐定碱、槐果碱和红景天苷都有抑制EV71病毒的作用，其主要作用方式是抑制病毒吸附，其作用机制可能是抑制病毒复制。这3种药物的有效浓度均较低，均在未造成明显细胞毒性的范围内，具有潜在的临床使用价值。本项目基本按照原定计划完成，为大青素和喹唑酮的临床应用奠定了基础，为抗手足口病药物开发提供了理论依据。