CREPT调控肝损伤及肝癌的分子机理

CREPT plays a critical role in physiological and pathological processes. CREPT is involved in embryonic development of mice and highly expressed in many kinds of human cancers. Based on the effect of CREPT on different tumors, this project aims to study the mechanism of CREPT on regulating liver acute injury and hepatic fibrosis and hepatocellular carcinoma. Our preliminary data show that hepatocellular CREPT-null mice have tolerance to liver injury and slight inflammatory reaction. This project will focus on studying the depletion and overexpression of CREPT on regulating inflammatory cytokines such as IL-6 and TNF-a which affect their relative STAT3 and NF-kB signaling pathways, resulting to hepatic injury and hepatocellular carcinoma. Furthermore, we intend to study these critical transcriptional proteins which are responsible for regulating the formation of CREPT transcription loop and leading to different liver diseases. This project will reveal the mechanism of CREPT on affecting hepatic injury and hepatocellular tumorigenesis.

CREPT蛋白在机体的生理和病理过程中发挥了重要作用。CREPT基因不仅参与胚胎的发育而且在多种肿瘤组织中异常高表达。本课题在发现CREPT影响许多肿瘤发生的基础上，研究CREPT在肝脏发育及其调控肝急慢性损伤和肝癌发生的分子机理。初步结果发现肝细胞CREPT基因敲除小鼠对肝损伤有一定耐受性并且炎症反应轻微一些，该项目将进一步探究肝细胞中CREPT敲除或者过表达后如何调控炎症因子尤其是IL-6和TNF-a的变化，继而影响相应的STAT3和NF-kB信号通路，导致肝急慢性损伤以及肝癌的发生；并探索CREPT通过这些关键转录因子影响转录环的形成，明确CREPT蛋白在肝急慢性损伤以及肝癌发生中的作用机制。

CREPT蛋白在肝脏的病理过程中发挥了重要作用。首先构建了CREPT特异性肝敲除小鼠，发现在出生后两周在肝脏中敲除CREPT基因并不影响小鼠肝脏的功能以及组织学结构。接着利用CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型，结果发现在肝细胞特异性 CREPT敲除加重了肝细胞的坏死。CCl4处理24h后，超氧化物歧化酶2、铁蛋白重链等抗氧化酶的转录水平大幅上调，而敲除CREPT抑制了这种作用，说明CREPT参与了CCl4诱导的肝细胞中抗氧化基因的转录激活，在急性肝损伤中促进了肝细胞的存活。并进一步发现CREPT能够和NF-kB信号通路中的p65/p50相互作用结合在SOD2或者FTH1启动子区从而促进其表达。进一步通过BDL诱导的肝慢性损伤模型发现，CREPT基因敲除小鼠对肝损伤有一定耐受性并且炎症反应轻微以及坏死区域更小一些，而CREPT转基因小鼠的肝损伤会更加严重，肝脏坏死区域更大，炎症因子表达水平升高；CREPT蛋白敲除后同时TGF-b1表达减少，实验发现CREPT与smad3存在相互作用，通过TGF-b1/smad信号通路促进了损伤和纤维化的加重。最后，利用RT-PCR、免疫组化以及western blot检测人的肝癌组织以及癌旁组织发现，CREPT在肝癌组织中呈高表达，而在癌旁组织中低表达或者不表达。再利用DEN诱导小鼠肝癌模型发现，肝细胞特异敲除CREPT基因的小鼠肝癌与预想不同，肝癌发生更容易，肿瘤数量更多，肿瘤直径更大；接着利用肝细胞特异过表达CREPT基因的肝癌模型发现，CREPT的转基因小鼠的肝癌发生率更小。这些结果表明，CREPT在小鼠肝脏上的作用可能与人的肝脏有所不同。