CREPT调控NF-kB信号通路在结肠癌发生中的分子机制

NF- kB signaling plays a critical role in physiological and pathological process. CREPT is newly identified as oncogene which is related with cancer cell growth, and highly expressed in many kinds of cancers. Based on the interaction of CREPT and RelA, this project aims to study the mechanism of CREPT in regulation of RelA activity. At the same time, we find that the phosphorylation modification of CREPT is required for regulating NF- kB signaling. Futhermore, the project will study the role of CREPT phosphorylation on regulating RelA activity. We intend to identify the critical motifs/ residues of CREPT phosphorylation and screen the important kinases which is responsible for modifing CREPT. Based on above results, the project will provide new insight into how CREPT regulates tumorigenesis mediated by NF- kB signaling.

NF- kB信号通路在生物体内的生理和病理过程中发挥着重要的作用。CREPT蛋白是一个重要的促进癌细胞生长相关蛋白，在许多种的肿瘤中都呈现异常的高表达。本课题在发现CREPT蛋白与RelA相互作用的基础上，研究CREPT调控NF- kB信号通路在结肠癌发生中的分子机理，同时发现CREPT蛋白的磷酸化修饰在此过程中起了重要的作用，本课题将深入研究CREPT的磷酸化修饰在该过程中如何发挥功能去调控RelA蛋白的活性，进而影响NF- kB信号通路。另外，鉴定CREPT上磷酸化修饰的关键氨基酸基序，进一步探索调节CREPT磷酸化修饰的关键蛋白激酶。在此基础上明确CREPT磷酸化修饰在NF-kB介导的结肠癌发生中的作用机制。

NF-kB信号通路在生物体的生理和病理过程中发挥着重要的作用，CREPT 也参与了生物体的生理和病理过程，尤其是在多种人类肿瘤中高表达。本课题在发现CREPT 蛋白与RelA相互作用的基础上，研究CREPT调控NF- kB信号通路在结肠癌发生中的分子机理。首先，通过免疫共沉淀实验和Pull-down实验验证CREPT与RelA相互作用，该相互作用依赖于TNF-a的刺激。并进一步进行了内源性的相互作用，证实这种相互作用在细胞中和组织中是真实存在的。利用免疫荧光实验发现，在有TNF-a存在的情况下，发现CREPT蛋白与RelA蛋白存在共定位于细胞核中。CREPT蛋白对p-p65的磷酸化水平也有影响，可以促进RelA的磷酸化，同时发现，CREPT蛋白影响RelA/P50符合物形成。.基于CREPT蛋白既没有激酶活性也没有磷酸酶活性，所以CREPT蛋白调控RelA的磷酸化肯定是通过其它激酶或者磷酸酶发挥了调控作用。通过网上预测及分析，我们发现CREPT蛋白可以作为激酶CDK6和Aurora B的底物之一。进一步通过免疫共沉淀实验和磷酸化实验发现，CDK6和Aurora B与CREPT之间存在相互作用，而且Aurora B与CDK6可以调控CREPT蛋白的磷酸化水平。磷酸化实验证明，CREPT蛋白的磷酸化可以被通用的磷酸酶lamda-ppase去磷酸化。同时通过网络软件分析，预测到几个位点，设计构建了不同的点突变后，我们找到了CREPT蛋白的S134和S145位点分别是CDK6和Aurora B作用的关键位点。进一步实验发现，激酶Aurora B 和CREPT相互作用可以协同调控 Cyclin B1 而调控细胞周期。通过细胞增殖实验等发现，该位点对于CREPT蛋白发挥作用十分重要。CREPT与RelA在多种肿瘤中存在着显著的正相关。CREPT敲除小鼠对于DSS诱导的肠炎更加敏感，我们推测，CREPT很可能通过调控NF-κB信号通路参与到肠上皮细胞的增殖和修复过程中。.综上，我们首次发现 CREPT 是一个在真核细胞中存在磷酸化活性的蛋白，提出了 CREPT 参与到 DNA 损伤修复，导致肿瘤细胞突变积累，影响癌细胞中 Aurora B 协同 CREPT 调控 Cyclin B1 的表达；同时通过调控NF-κB信号通路参与肠炎/肠癌的发生发展；为将来治疗癌症提供了新的参考。