尼达尼布通过FAK介导的信号通路抑制肺纤维化的作用及分子机制研究

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a major medical problem for the aging population worldwide which serious threat to human life and health.Nintedanib is a kind of small molecule intracellular tyrosine kinase inhibitor, which can effectively ease the IPF.Based on our previous study that FAK regulates fibroblast migration and plays a central role in fibrosis,we will research whether nintedanib refrain IPF through suppression tyrosine 397 phosphorylatio of FAK .This project choose FAK as a break point,then study the molecular mechanism of how nintedanib resist the multiple molecular pathways of downstream factor of integrinβ1,Erk,Rac, etc.This project will take the pulmonary fibrosis in mice and HLFs as model, testing by Wound scratch assay、RT-PCR、Western blot to detect the regulation effect of nintedanib on the multiple downstream pathways of FAK, further adopting the technology of RNAi to block the sites of FAK, mutually verifying the process of how nintedanib through FAK to block the hepatic fibrosis molecular mechanism, demonstrating the important hypothesis of nintedanib through FAK to ease the IPF.

特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)严重威胁人类的生命与健康。尼达尼布是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂( Tyrosine Kinase Inhibitor，TKI),目前有研究表明其有较好的抑制IPF的功能，但具体机制尚不十分明确。本项目在我们前期研究发现粘着斑激酶（Focal Adhension Kinase，FAK）对肺纤维化的发生发展起重要作用的基础上，研究尼达尼布是否通过抑制FAK的活化（FAK酪氨酸397磷酸化）从而抑制肺纤维化。拟通过细胞划痕试验、RT-PCR、Western blot等方法结合采用核糖核酸干扰(RNA interfere,RNAi)技术，研究尼达尼布通过FAK下游Rac、ERK、S100A4等介导的多条分子通路拮抗肺纤维化的分子机制。论证尼达尼布通过调控FAK抑制肺纤维化的重要假说。

按照项目书2017.01-2021.12研究计划,本课题组经过4年努力，顺利完成课题预期目标。发表论文9篇，中文核心期刊7篇，完成3名研究生培养，在读博士生1名、研究生3名。整个项目基本按照计划进行研究， 取得了预期实验结果。我们实验结果表明：TGF-β1能诱导人胚肺成纤维细胞的活化和上皮间质转化；尼达尼布对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞有增殖抑制作用，并且成剂量依赖关系；通过TGF-β1 5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml的WB灰度分析，得出TGF-β1 5ng/ml为实验的最佳浓度；尼达尼布通过FAK/S100A4、FAK/p-ERK 介导的信号通路抑制小鼠的肺纤维化；尼达尼布能减少I型胶原、 III型胶原、A-SMA的产生，在此基础上，以病毒为载体过表达FAK,同样在尼达尼布作用下，观察到该基因过表达后能部分逆转尼达尼布的作用；动物实验小鼠建立肺纤维化模型，研究表明了尼达尼布能保护肺脏，减少肺成纤维细胞的迁移、增殖及细胞外基质沉积等免疫炎症反应作用；FAK 在肺纤维化的发生发展中发挥了重要作用；相应结果发表在《Scientific Reports》、《世界最新医学信息文摘》、《贵州医科大学学报》、《临床误诊误治杂志》、《医学综述杂志》、《中国现代医药杂志》、《贵州医药》、《World Latest Medicine Information》等期刊中，尚有多篇文章审稿中，尚有结果正在整理准备投稿。项目培养4名研究生，在读博士生1名、在读研究生3名。