5-羟色胺/褪黑素能系统在六味地黄方双向调节黑素代谢中的作用

We have detected that Liuweidihuang Decoction have two-way adjustment to the mechanism in the laboratory which is consistent with the clinical treatment, so we put forward a new hypothesis that it's through Serotoninergic/melatoninergic System that Liuweidihuang Decoction adjust the melanin in the skin. There are three key links in Serotoninergic/melatoninergic System: ①Substrate and its associated receptor（5-HT、5-HT1A）; ②Metabolites and related receptor（MT、mt1）; ③Some key rate-limiting enzymes（HIOMT、AANAT）.We will explore the changes of them after the intervention by medicated serum of Liuweidihuang Decoction. What methods to be used are cultured-skin cells, high performance liquid chromatography, and reverse transcription-polymerase chain reaction. It's the first study about the molecular mechanism of the two-way adjustment of Liuweidihuang Decoction.

六味地黄方加减既能治疗色素脱失性疾病白癜风又能治疗色素增多性疾病黄褐斑，未有人对其临床的双向性深入进行探讨。在前期研究中，我们发现六味地黄方含药血清体外对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性呈现双向调节作用，与临床相符。本项目是根据皮肤中的5-羟色胺/褪黑素（5-HTs/MTs）能系统在不同应激状态下对黑素代谢的"双向调节"特性，提出新的假设：六味地黄方通过皮肤中的5-HTs/MTs能系统发挥黑素的调节作用。根据5-HTs/MTs能系统的代谢通路，我们采用人工培养皮肤细胞、高效液相色谱法、RT-PCR等方法观察经六味地黄方含药血清体外干预后，白癜风和黄褐斑皮损组织中5-HTs/MTs能系统：①底物及相关受体（5-HT、5-HT1A）；②代谢产物及相关受体（MT、mt1）；③关键限速酶（HIOMT、AANAT）三个关键环节的影响，旨在探寻六味地黄方发挥黑素调节作用的分子机制。

1.项目的背景：.滋补肝肾的代表方六味地黄方具有“双向”调节黑素代谢的作用，为了探讨其机制，以及皮肤中的5-羟色胺/褪黑素能系统在不同应激状态下对黑素代谢呈上调或下调的“双向调节”特性，提出新的假设：六味地黄方通过皮肤中的5-羟色胺/褪黑素能系统发挥黑素的调节作用，所以我们观察了：①六味地黄方含药血清在体外对于人正常黑素细胞细胞增殖及褪黑素合成限速酶ANNAT.、HIOMT活性的影响；②六味地黄方体外对人正常黑素细胞与角质形成细胞共培养模型中细胞增殖的影响；③六味地黄方体外对人正常黑素细胞与角质形成细胞共培养模型中5-HTs、MT含量及合成限速酶ANNAT、HIOMT活性的影响。.2.主要研究内容及结果.根据皮肤MC产生5-HT并将其转化为MT的信号转导通路，研究内容包括底物：5-HT；代谢产物：MT；关键限速酶HIOMT、AANAT三个关键环节。.⑴研究六味地黄方含药血清体外对于人正常黑素细胞细胞增殖及褪黑素合成限速酶ANNAT、HIOMT活性的影响，六味地黄方体外对黑素细胞增殖与AANAT活性存在相关性，且差异有统计学意义（P<0.05）。但六味地黄方含药血清对黑素细胞各用药剂量组HIOMT的mRNA含量无明显变化。.⑵研究六味地黄方含药血清体外对人正常黑素细胞与角质形成细胞共培养模型中细胞增殖的影响，对于角质形成细胞共培养模型低浓度的含药血清对细胞增殖无影响，中高浓度的六味地黄方含药血清可以抑制共培养模型中细胞的增殖，特别是含药血清浓度为40％时对细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）。.⑶研究六味地黄方含药血清体外对人正常黑素细胞与角质形成细胞共培养模型中5-HTs、六味地黄方低中浓度含药血清对共培养模型中AANAT表达下调，呈浓度剂量依赖性的降低，有统计学意义（P<0.05）；但六味地黄方含药血清对黑素细胞各用药剂量组HIOMT的mRNA含量无明显变化。.3.科学意义：.本课题是在之前研究的工作基础上，根据皮肤中的5-羟色胺/褪黑素能系统在不同应激状态下对黑素代谢呈上调或下调的“双向调节”特性，提出新的假设：六味地黄方通过皮肤中的5-羟色胺/褪黑素能系统发挥黑素的调节作用，经过实验证实：5-HTs/MTs能系统可能是六味地黄方发挥调节黑素代谢的中介物质基础，主要通过5-HTs、MT及合成限速酶ANNAT来进行调控，进一步揭示其调节黑素代谢的机制。