TRPC6蛋白在糖尿病肾病发病机制中的调控作用及其黄芪总苷的防治作用研究

糖尿病肾病是糖尿病最常见的严重并发症之一，亦是导致终末期肾脏病和糖尿病患者死亡的主要的原因。大量研究表明糖尿病肾小球高滤过率可能与肾小球系膜细胞（MCs）的收缩功能障碍有关，但MCs 功能异常的确切机制尚不清楚；我们等的前期研究揭示其可能与MCs的TRPC6蛋白表达下降有关。本课题拟采用Western blot、定量PCR 、hTRPC6-shRNA 、流式细胞仪、免疫组化和膜片钳技术等试验方法，研究MCs TRPC6的mRNA、蛋白表达的变化、研究TRPC6的变化与NADPH 氧化酶产生的活性氧氧化应激的关系以及NF-κB信号转导的调节机制。观察黄芪总苷(AST)对糖尿病模型大鼠肾病是否具有防治作用，研究高糖状态下培养MCs的TRPC6上述指标变化，在整体、细胞和分子水平上探讨糖尿病肾病的发病机制与AST防治作用和机制，为减轻和延缓糖尿病肾病并发症的产生与防治新药做基础性的研究。

糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）是DM最常见和最严重的并发症之一，约20%～30%的1型糖尿病（Type 1 diabetes mellitus , T1DM）或2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者最终并发DN，其中相当一部分可进展为终末期肾病（End-stage renal disease, ESRD）。DN是糖尿病患者死亡的重要原因。DN发病机制尚未完全阐明，大量研究表明糖尿病肾小球高滤过率可能与肾小球系膜细胞（MCs）的收缩功能障碍有关，但MCs 功能异常的确切机制尚不清楚；我们等的前期研究揭示其可能与MCs的TRPC6蛋白表达下降有关。. 本课题采用Western blot、定量PCR 、hTRPC6-shRNA、流式细胞仪、免疫组化等试验方法，研究MCs TRPC6的mRNA、蛋白表达的变化、研究TRPC6的变化与NADPH 氧化酶产生的活性氧氧化应激的关系以及NF-κB信号转导的调节机制。观察黄芪总苷(AST)对糖尿病模型大鼠肾病是否具有防治作用，研究高糖状态下培养MCs的TRPC6上述指标变化，在整体、细胞和分子水平上探讨糖尿病肾病的发病机制与AST防治作用和机制，为减轻和延缓糖尿病肾病并发症的产生与防治新药做基础性的研究。. 研究结果显示，高糖能诱导人肾小球系膜细胞的异常增殖和肥大，并显著抑制系膜细胞TRPC6蛋白的表达和钙离子内流，从而损伤系膜细胞活力和收缩功能；高糖诱导系膜细胞损伤的作用可能是通过调节NADPH氧化酶/ROS/Akt/NF-κB信号通路来实现的，在该信号通路中，NADPH氧化酶性ROS生成与Akt信号活化可能是相互平行或相互交叉作用，并共同存在于NF-κB信号的上游；AST对实验性糖尿病小鼠、大鼠和高糖培养人肾小球系膜细胞均具有一定的保护作用，其机制可能与抑制NADPH氧化酶/ROS/Akt/NF-κB信号通路，提高TRPC6表达水平有关。该成果不仅进一步深化了对DN发病机制的认识，为临床治疗DN提供了新的思路与靶点，也为AST进一步开发奠定了扎实的药理学实验基础，具有重要的理论与现实意义。