Klotho在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用及黄芪皂苷甲的干预研究

Podocyte injury plays a key role in the development and progression of diabetic nephropathy(DN).Klotho, an anti-aging gene, is newly discovered expressing in podocytes in 2017 and is closely related to podocyte injury.In our preliminary study,we have demonstrated that high glucose downregulated Klotho expression in podocytes,and Astragaloside IV (AS-IV),a major component isolated from Radix Astragali,can reverse the lower expression of Klotho,then inhibiting podocyte injury. Therefore,we hypothesize that Klotho poverty involves in podocyte injury in DN, and AS-IV inhibits podocyte injury by way of Klotho.Based on this hypothesis, we will observe podocyte injury in morphology and function aspects, technologies such as histology, histology, immunology and cell biology are used to demonstrate Klotho scarcity involving in podocyte injury,and Co-immunoprecipitation,RNA interference, calcium imaging and whole cell patch clamp measurement methods are applicated to find and confirm Klotho downstream target molecules, deeply exploring the role mechanisms of Klotho. Furthermore we will clarify AS-IV protecting podocyte injury in DN via Klotho pathway. The project will provide new measures and strategies for the treatment of diabetic nephropathy in Chinese medicine fields.

足细胞损伤在糖尿病肾病的发生发展过程中起关键作用。Klotho，一种抗衰老基因，2017年首次发现在足细胞有表达，并与足细胞损伤密切相关。前期研究中，我们发现高糖抑制足细胞Klotho表达，同时传统中药单体黄芪皂苷甲(AS-IV）可逆转Klotho的低表达，改善高糖诱导的足细胞损伤，提示Klotho缺乏可能参与足细胞损伤，而AS-IV可能通过促进Klotho表达改善足细胞损伤，延缓糖尿病肾病进程。基于这一假说，本项目拟从细胞形态，功能方面系统评估足细胞损伤，通过组织学、免疫学、细胞生物学等方法阐明Klotho缺乏是否参与足细胞损伤，利用免疫共沉淀、RNA干扰、钙成像、全细胞膜片钳测定技术寻找和坚定Klotho下游靶分子，探讨Klotho的作用机理，并在此基础上探讨AS-IV通过Klotho途径保护足细胞损伤，为糖尿病肾病的中医药治疗提供新的依据。

足细胞损伤在糖尿病肾病（DN）的发生发展过程中起关键作用。Klotho，一种抗衰老基因，2017年首次发现在足细胞有表达，并与足细胞损伤密切相关。目前新近研究表明AS–IV能延缓DN的发生发展，特别是可以改善DN的足细胞损伤，但其发挥作用的确切机制有待进一步研究，而与Klotho有关的作用机制尚未见报道。为深入研究DN足细胞损伤以及AS-IV改善足细胞损伤的分子机制，本项目通过体内体外实验研究Klotho缺乏是否参与了足细胞损伤，并进一步探讨与TRPPC6有关的作用机理，最后阐明AS-IV是否通过Klotho途径保护DN足细胞损伤。研究结果表明Klotho缺乏参与了DN足细胞损伤；而Klotho可通过抑制其下游信号分子TRPC6表达改善DN足细胞损伤；同时AS-IV可上调Klotho、下调TRPC6表达，从而保护DN足细胞损伤。本项目阐明了Klotho抑制DN足细胞损伤；并进一步表明了Klotho通过TRPC6改善DN足细胞损伤的作用机理；最后在此基础上明确了AS-IV通过Klotho途径保护DN足细胞损伤，为DN的诊断和治疗提供了新的思路和策略。