齐墩果酸对动脉粥样硬化UCP2/ROS/cytoC/AIF、PON2/ PPAR/AP-1及PON2、UCP2/ FGF-2/ P53 /TSP-1通路的调控

We investigate the effect of burdock oleanolic acid (OA) on the pathogenesis of atherosclerosis from the point of Chinese medicine. Quail atherosclerosis model will be established to screen and identify the effective dose of burdock root pharmacodynamic substance-OA, and to investigate the protective mechanism from tissue morphology, lipid and antioxidant molecules. This project intends to prove the regulation of OA on ox-LDL induced endothelial cell injury model via PON2, UCP2/ROS/cytoC/AIF and PON2/PPAR/AP-1 pathway, using molecular biology and small molecule RNA interference technology to reveal the change of PON2 and UCP2 with time. We detect the relationship between the expression of mtNOS and NO, establish the ESR to detect ROS/NO in tissues and cells, and preparate OA -FITC probe to determine the initial targets of OA. We also establish ox-LDL induced smooth muscle cell proliferation model, to confirm mtNOS, PON2 and USP2 as new signaling molecules in vascular smooth muscle cell proliferation, and study the regulation of OA on PON2, and UCP2/FGF-2/ P53 /TSP-1 pathway.

从中医角度探究牛蒡齐墩果酸（OA）抗动脉粥样硬化（AS）的病机。复制鹌鹑动脉粥样硬化模型，筛选并确定牛蒡根药效学物质OA预防的有效剂量，从病理组织学、血脂、抗氧化分子角度探究其作用机制。复制ox-LDL损伤的内皮细胞病理模型，采用分子生物学的方法和小分子RNA干扰技术，揭示PON2和UCP2的经时变化，证明AS和肿瘤共同病因的学说，阐明OA对PON2、 UCP2/ROS/cytoC/AIF及PON2/PPAR/AP-通路的调控作用。研究mtNOS的经时表达与NO的相关性，建立ESR定量检测OA抗组织和细胞ROS/NO的方法，制备齐墩果酸-FITC探针，确定OA的最初作用靶点。复制ox-LDL损伤平滑肌细胞增殖模型，确认mtNOS、PON2和USP2是血管平滑肌细胞增值中新的信号分子，研究OA对PON2、UCP2/ FGF-2/ P53 /TSP-1通路的调控。

复制雄性鹌鹑AS病理模型，证实OA具有预防AS作用，且预防AS作用与其调血脂、抗氧化、减轻鹌鹑主动脉脂质沉积和病理组织学的改变有关。采用RT-PCR法检测组织中PON2、PPARγ、eNOs、AIF的mRNA含量，首次从动物水平的分子生物学角度证实了OA能够通过PON2、PPARγ、eNOS 、AIF这四个基因预防鹌鹑AS的发生、发展。.复制ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型，采用酶化学方法证实OA预保护能够量效依赖性提高损伤细胞中CAT、GSH-PX、NOS，SOD活性，增加GSH、NO含量同时降低细胞内MDA含量；首次证明OA 能够通过调控T-bx20/PPARγ/PON2，PON2/AP-1/ROS，LOX-1相 关通路发挥抗AS作用；HUVECs细胞内ROS的经时结果证实ox-LDL作用6h后表达量最高，而不同浓度OA预保护后，可降低细胞内ROS的含量；分子生物学技术检测线粒体内UCP2、cytoc、AIF其表达量的经时变化，表明线粒体中UCP2的表达先降低后升高，在6h降到最低点，并且首次证实OA能够激活线粒体里UCP2的表达，从而抑制cytoc/AIF通路；首次以电子自旋共振技术，建立同时检测HUVECs中ROS、NO含量的方法，结果与之前检测相吻合， ESR捕捉了PPARγ抑制后内NO及ROS， ROS含量明显升高，表明PPARγ通过降低ROS来发挥作用；LOX-1作为ox-LDL的内皮受体通过多条信号通路参与内皮细胞的氧化损伤，将LOX-1表达抑制，检测不同处理组HIF-1α、NADPH氧化酶亚基（p47phox、p67phox、gp91phox）、Nrf2、HO-1等蛋白和mRNA表达，采用流式细胞仪或荧光染色法检测ROS含量，首次证实了OA能够通过LOX-1/ROS/HIF-1α以及LOX-1/NADPH 氧化酶/ROS、Nrf2/HO-1这两条通路发挥抗氧化作用。.复制 ox-LDL诱导 VSMCs 增殖模型，发现了UCP2、FGF-2、p53、TSP-1、CoQ10 、ROS、Cytoc与VSMCs增殖分别存在正负相关性。首次发现了UCP2参与了VSMCs增殖，利用转染/抑制剂技术首次证明OA 能够通过调控VSMCs 细胞中UCP2/FGF-2/p53/TSP-1，CoQ10/UCP2/ROS/Cytoc通路发挥抗AS作用。